技術領域

本發明屬于蛋白轉導技術領域，具體涉及一種TAT-PAP融合蛋白，本發明還涉及該TAT-PAP融合蛋白的制備方法和應用。

背景技術

糖尿病神經病理性痛是糖尿病最嚴重的并發癥之一，是由慢性糖尿病狀態下外周感覺神經廣泛變性和炎性脫髓鞘所引起，主要表現為雙側下肢遠側端產生自發痛(spontaneous?pain)，異常疼痛(allodynia)和痛覺過敏(hyperalgesia)，使肢體功能異常，因而對患者身心造成嚴重危害。目前臨床上對于糖尿病神經病理性痛的治療，除了針對病因嚴格控制血糖，改善微循環外，一些經典的鎮痛藥物，如嗎啡、非甾體類抗炎藥等，對糖尿病性痛的緩解療效甚微；有證據顯示三環類抗抑郁藥和抗驚厥藥，如阿米替林、加巴噴丁等，對糖尿病神經病理性痛有一定的鎮痛作用，但其副作用如嗜睡、眩暈、低血壓、心律失常，幻覺等，嚴重制約了藥物的臨床應用。因此如何更有效的治療糖尿病神經病理性痛成為目前臨床亟待解決的問題，而闡明糖尿病性痛的機制和研發新型鎮痛藥物則意義重大。

前列腺酸性磷酸酶(prostatic?acid?phosphatase，PAP)是一種非特異性外核苷酸酶，早期曾被稱為氟化物耐受的酸性磷酸酶(fluoride-resistant?acid?phosphatase，FRAP)或硫胺素單磷酸酶(thiamine?monophosphatase，TMPase)。PAP在體內有兩種存在形式，分泌型PAP(S-PAP)和跨膜型PAP(TM-PAP)。S-PAP由前列腺上皮細胞合成并分泌，正常狀態下，在血中含量極低，只有疾病狀態(如前列腺癌)時，才大量進入血液。長期以來，S-PAP一直被當作前列腺癌的腫瘤標記物用于臨床診斷。而TM-PAP則主要表達于非前列腺組織，如神經組織、肝臟等的細胞膜上。在神經系統中，TM-PAP主要表達于脊髓背角(spinal?dorsal?horn，SDH)II層內的初級傳入終末和背根神經節(dorsal?root?ganglion，DRG)的小型神經元。無論哪種PAP，在結構上都包含一個信號肽和酸性磷酸酶結構域，只是TM-PAP在C端多了一個跨膜結構域。PAP是通過產生腺苷而發揮鎮痛作用的。Zylka小組的研究發現，敲除PAP基因的小鼠，由慢性炎性痛和神經病理性痛所誘導的熱痛敏和機械痛敏都明顯增強，提示PAP可能在疼痛過程中起到了一定的作用。疼痛-功能學相互關聯的研究中發現，鞘內注射PAP蛋白可使野生型和神經損傷所致的神經病理性痛模型小鼠出現較強的鎮痛和抗痛覺過敏作用；重要的是PAP的鎮痛效果與嗎啡相比，作用時間更持久，作用效果更明顯，可達嗎啡的8倍，且未觀察到成癮及耐受等不良反應。進一步的實驗證實了PAP是通過將胞外的單磷酸腺苷(AMP)去磷酸化生成腺苷，后者活化脊髓背角的腺苷受體而發揮鎮痛作用的。Sowa等研究表明PAP的鎮痛效果具有pH依賴性，在pH為5.6時，PAP的酶活性最高，其鎮痛效果最佳。綜上所述，PAP是一種極具開發潛力的鎮痛藥物。然而，外源性的PAP蛋白難以穿過血脊屏障，使其進一步的研究和臨床應用受到了極大的限制。