[發明專利]一種TAT-PAP融合蛋白及其制備方法和應用在審
| 申請號: | 201410465163.7 | 申請日: | 2014-09-12 |
| 公開(公告)號: | CN104211816A | 公開(公告)日: | 2014-12-17 |
| 發明(設計)人: | 崔媛媛;茍興春;方科;徐浩;張妮;李妮;趙湘輝 | 申請(專利權)人: | 西安醫學院 |
| 主分類號: | C07K19/00 | 分類號: | C07K19/00;C12N15/70;A61K38/46;A61K47/48;A61P25/02 |
| 代理公司: | 西安弘理專利事務所 61214 | 代理人: | 羅笛 |
| 地址: | 710021 *** | 國省代碼: | 陜西;61 |
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| 摘要: | |||
| 搜索關鍵詞: | 一種 tat pap 融合 蛋白 及其 制備 方法 應用 | ||
1.一種TAT-PAP融合蛋白,其特征在于,該融合蛋白是由人類Ⅰ型免疫缺陷病毒HIV-Ⅰ的轉錄反式激活因子TAT的蛋白轉導域PTD和前列腺酸性磷酸酶PAP形成的融合蛋白TAT-PAP。
2.根據權利要求1所述的TAT-PAP融合蛋白,其特征在于,該融合蛋白具有SEQ?ID?NO:1所示的氨基酸序列。
3.根據權利要求1或2所述的TAT-PAP融合蛋白的制備方法,其特征在于,具體步驟如下:
步驟1,選取包含蛋白轉導域PTD的轉錄反式激活因子TAT,且其兩端分別含有Nco?I和Xho?I酶切位點序列的pTAT-HA表達載體;pTAT-HA表達載體中PTD的cDNA序列為SEQ?ID?NO:2所示的序列;
步驟2,從Genebank中獲取前列腺酸性磷酸酶PAP的cDNA序列,經原核表達優化PAP基因序列,PAP基因序列為SEQ?ID?NO:3所示的序列;
步驟3,將步驟2經原核表達優化后的PAP基因序列合成為PAP基因片段,序列兩端分別含有Nco?I和Xho?I酶切位點的序列,并裝載到pUC57載體中,即為pUC57-PAP載體;
步驟4,將pTAT-HA表達載體和pUC57-PAP載體均用限制性內切酶Nco?I和Xho?I進行雙酶切,酶切條件為:37℃反應1~16h,65℃滅活20min,分別回收載體pTAT和目的基因片段PAP;
步驟5,用T4連接酶連接酶切后的載體pTAT和目的基因片段PAP,反應條件為:室溫,10min,篩選陽性單克隆獲得pTAT-PAP重組質粒;
步驟6,將pTAT-PAP重組質粒轉化大腸桿菌DE3感受態細胞;
步驟7,誘導融合蛋白表達,即得到TAT-PAP融合蛋白。
4.根據權利要求1或2所述的TAT-PAP融合蛋白在制備治療糖尿病神經病理性痛藥物中的應用。
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