技術領域

本發明涉及臨床凝血檢驗制劑的制備方法，具體凝血因子IX質控品制備方法。

背景技術

凝血因子IX測定具有重要的臨床意義。隨著凝血因子IX活性檢驗項目不斷拓展到疾病診斷和治療中的各個領域，使用凝血因子IX質控品對凝血因子IX活性檢測進行室內質控和室間質評就顯得尤其重要。目前針對凝血因子IX檢測的試劑、儀器較多，不同的試劑和檢測儀器、檢測原理各不相同，導致其結果差別很大。無論采用何種方法，進行室內質控和參加室間質評是保障檢測結果具有良好重復性和可比性的必要手段，而這些質量保證措施的開展都離不開凝血因子IX質控品。

目前臨床實驗室使用的凝血質控物通常為多參數凝血質控品，其異常值凝血質控品除凝血因子IX水平異常外其它參數也為異常，難以保證病理性樣本凝血因子IX測定結果的準確性，同時也難以保證凝血因子IX室內質控和室間質評的有效性。

國內凝血質控品幾乎被國外試劑廠商壟斷，產品價格昂貴且水平單一，無法滿足臨床檢驗多活性水平的需求，因此，研發生產國內自主品牌的多個濃度水平的凝血因子IX質控品迫在眉睫。

發明內容

針對上述技術問題，本發明提供一種制備凝血因子IX質控品的方法及獲得凝血因子IX質控品。本發明方法制備的凝血因子IX質控品為凝血因子IX多個濃度水平，且其它凝血因子含量在正常范圍；該產品均一性和穩定性較好，滿足臨床對凝血因子IX質控品檢驗的質量控制要求。

為了實現上述發明目的，本發明提供以下技術方案：凝血因子IX質控品制備方法，包括以下步驟：

(1)將人靜脈采集的血液與抗凝劑以體積比為9∶1加入混合，在2℃～8℃條件下離心15分鐘，相對離心力為2500g，分離吸取上層血漿，將多人份血漿混合，即得多人份混合血漿；抗凝劑為枸櫞酸三鈉溶液，其濃度為0.109mol/L～0.129mol/L。

(2)免疫親和層析柱預先用緩沖液在10℃～18℃條件下平衡，緩沖液包括0.02mol/L?Tris、0.15mol/L?NaCl、8mmol/L?MgCl₂，pH7.25。

(3)原料血漿加入MgCl₂后，原料血漿中MgCl₂濃度為4.5～5.5mmol/L。上免疫親和層析柱，收集免疫親和層析柱下方流出的血漿，即為缺乏凝血因子IX血漿。

(4)將缺乏凝血因子IX血漿與多人份混合血漿按照要求比例混合，即可制備成不同濃度水平的凝血因子IX質控品。

(5)將制備的凝血因子IX質控品加入凍干保護劑，分裝，冷凍干燥。加入的凍干保護劑，包括質量比例占凝血因子IX質控品的0.5～1.5％Hepes、l～5％甘氨酸、0.5～5％甘露醇。

本發明提供的凝血因子IX質控品制備方法，用抗人凝血因子IX單克隆抗體免疫親和層析柱將多人份混合血漿進行親和層析，去除多人份混合血漿中的凝血因子IX即為缺乏凝血因子IX血漿；再將多人份混合血漿與缺乏凝血因子IX血漿按照一定比例混合，制備成凝血因子IX含量為不同濃度水平的凝血因子IX質控品，加入凍干保護劑，分裝，冷凍干燥，獲得凝血因子IX質控品。

本發明提供的制備方法中，抗人凝血因子IX單克隆抗體免疫親和層析柱的制備方法為將一種能夠高度特異性的連接凝血因子IX的單克隆抗體偶聯至經CNBr活化的Sepharose4B瓊脂糖凝膠上，組成免疫親和層析柱。在Mg²⁺存在的條件下，當血漿通過該免疫親和層析柱時，唯獨凝血因子IX被吸附，其他凝血因子的活性基本未變。

本發明制備的凝血因子IX質控品，其產品均一性、穩定性及凍干品復融后穩定性好，可代替進口產品用于凝血因子IX檢測的質量控制，有利于降低檢測成本，提升我國對凝血因子IX檢測的能力。

具體實施方式

結合實施例，進一步闡述本發明：

實施例以制備活性為30％的凝血因子IX質控品為例。

(1)將人靜脈采集的血液與抗凝劑以體積比為9∶1加入混合，在2℃～8℃條件下離心15分鐘，相對離心力為2500g，分離吸取上層血漿，將多人份血漿混合，即得多人份混合血漿；抗凝劑為枸櫞酸三鈉溶液，其濃度為0.109mol/L～0.129mol/L。

(2)免疫親和層析柱預先用緩沖液在10℃～18℃條件下平衡，緩沖液包括0.02mol/L?Tris、0.15mol/L?NaCl、8mmol/L?MgCl₂，pH7.25。