[發明專利]一種測定配方奶粉中低聚半乳糖含量的檢測方法有效
| 申請號: | 201410415976.5 | 申請日: | 2014-08-22 |
| 公開(公告)號: | CN104655771B | 公開(公告)日: | 2018-11-13 |
| 發明(設計)人: | 宋薇 | 申請(專利權)人: | 譜尼測試集團股份有限公司 |
| 主分類號: | G01N30/88 | 分類號: | G01N30/88 |
| 代理公司: | 暫無信息 | 代理人: | 暫無信息 |
| 地址: | 100080 北京市海*** | 國省代碼: | 北京;11 |
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| 摘要: | |||
| 搜索關鍵詞: | 低聚半乳糖 半乳糖 乳糖 檢測 配方奶粉 提取原液 分解液 酶解 低溫真空干燥 磷酸鹽緩沖液 半乳糖苷酶 丙酮定容 待測樣品 氮氣吹干 氣相色譜 取上清液 微孔濾膜 質譜測定 靈敏度 乳糖酶 提取液 減去 水解 質譜 奶粉 游離 釋放 | ||
1.一種測定配方奶粉中低聚半乳糖含量的檢測方法,其特征在于該方法包括以下步驟:
(1)提取:稱取均勻樣品1.0g,精確至0.01g,于50mL刻度塑料離心管中,加入40mL 0.2M磷酸鹽緩沖液溶解,渦旋混勻,在80℃±2℃水浴中持續振搖提取30min,冷卻至室溫后用磷酸鹽緩沖溶液定容至100mL,移取5.0mL試樣的提取溶液于50mL容量瓶中,用磷酸鹽緩沖溶液定容至50mL,備用;其中,所述磷酸鹽緩沖液由22.0g磷酸二氫鉀和6.0g磷酸氫二鉀經1.0L二級水溶解制備;
(2)酶解;移取提取液1.0mL于10mL刻度塑料離心管中,加入0.5mLβ-半乳糖苷酶溶液,混勻,在60℃±2℃水浴中持續振搖60min,冷卻至室溫后用20%乙腈定容至10mL,搖勻,10000r/min離心10min,上層水相用濾紙過濾,用0.22μm水相濾膜過濾,待衍生;其中所述的β-半乳糖苷酶溶液由源于米曲霉的β-半乳糖苷酶配置而得,50U/mL;
(3)酶解前:同時移取提取液1.0mL于10mL刻度塑料離心管中,加入0.5mL磷酸鹽緩沖溶液,混勻,在60℃±2℃水浴中持續振搖60min,冷卻至室溫后用20%乙腈定容至10mL,搖勻,10000r/min離心10min,上層水相用濾紙過濾,然后用0.22μm水相濾膜過濾,待衍生;
(4)衍生:分別移取(2)和(3)的最終樣液1mL,氮氣吹干或50~60℃低溫真空干燥后,分別加入400μL N,N-二甲基甲酰胺(DMF)和200μL衍生試劑,保證密封并震蕩混勻,75℃±2℃衍生30min,冷卻后,用丙酮定容至1mL,過0.22μm有機膜;其中,所述的衍生試劑為N,O-雙(三甲基硅烷基)三氟乙酰胺和三甲基氯硅烷按照體積比99∶1混合配置而得;
(5)測定:定容后的溶液進入氣相色譜-質譜儀,選擇離子掃描檢測(SIM),外標法定量;計算酶解后半乳糖濃度C1,以及計算提取原液中游離乳糖的濃度C2和游離半乳糖的濃度C3;
(6)采用氣相色譜-質譜儀,配電子轟擊源(EI);氣相色譜-質譜條件:色譜柱:DB-5MS毛細管柱,30m×0.25mm×0.25μm;進樣口:280℃;傳輸線溫度:280℃;氦氣流速為1.0mL/min;進樣方式:分流,分流比20∶1;進樣量1μL;柱溫:150℃;升溫程序:從150℃以4℃/min升溫至230℃,以20℃/min升溫至280℃并保持15min;載氣:氦氣;流速:1.0mL/min,恒流;電離方式:EI;電離能量:70eV;測定方式:SIM;溶劑延遲:5min;離子源溫度:230℃;并根據保留時間定性,半乳糖和乳糖的衍生物的定性離子皆為m/z 191和m/z 217,以m/z 204為定量離子;
(7)計算公式:
樣品中低聚半乳糖含量X按公式(a)計算,數值以mg/100g表示;
式中:
X——樣品中低聚半乳糖含量,單位為毫克每百克(mg/100g);
1.35——折算系數因子,所述1.35為低聚半乳糖原料的經驗k值;
Gt——酶解分解液中最終的半乳糖含量,單位為毫克每百克(mg/100g);
Lb——提取液原液中的乳糖含量,單位為毫克每百克(mg/100g);
1.9——乳糖換算成半乳糖的經驗換算系數;
Gb——提取原液中的半乳糖含量,單位為毫克每百克(mg/100g);
公式(a)中Gt、Lb、Gb按照公式(b)-(d)計算:
上述公式中;
Gt——酶解分解液中最終的半乳糖含量,單位為毫克每百克(mg/100g);
Cl——酶解分解液中最終的半乳糖濃度,單位為微克每毫升(μg/mL);
Lb——提取原液中的乳糖含量,單位為毫克每百克(mg/100g);
C2——提取原液中的乳糖的濃度,單位為微克每毫升(μg/mL);
Gb——提取原液中的半乳糖含量,單位為毫克每百克(mg/100g);
C3——提取原液中的半乳糖濃度,單位為微克每毫升(μg/mL);
m——樣品稱樣量,單位為克(g);
V——樣品處理過程稀釋體積,單位為毫升(mL);
10——單位轉換系數。
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