1.一種自體樹(shù)突狀細(xì)胞激活腫瘤浸潤(rùn)性T淋巴細(xì)胞的制備方法，其特征在于，使用自體腫瘤抗原負(fù)載的樹(shù)突狀細(xì)胞作為滋養(yǎng)層細(xì)胞和白介素2，激活擴(kuò)增腫瘤浸潤(rùn)性T淋巴細(xì)胞，使腫瘤浸潤(rùn)性T淋巴細(xì)胞得以大量增殖，培養(yǎng)到20天細(xì)胞數(shù)達(dá)到5×10⁸以上，增殖倍數(shù)達(dá)到1000倍以上，并具有高活性的抗腫瘤細(xì)胞毒性應(yīng)答。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，所述方法中以樹(shù)突狀細(xì)胞負(fù)載了自體腫瘤抗原，并在樹(shù)突狀細(xì)胞膜上高表達(dá)的CD80、CD83、CD86和CD137L多肽，及其加工的腫瘤抗原表位，通過(guò)強(qiáng)酸，強(qiáng)堿和/或輻照、及通過(guò)高速離心收集樹(shù)突狀細(xì)胞進(jìn)行純化收集。

3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，所述方法中腫瘤浸潤(rùn)性T淋巴細(xì)胞和自體腫瘤抗原來(lái)源于癌癥患者手術(shù)后新鮮自體腫瘤組織。

新鮮自體腫瘤組織使用眼科剪剪碎成1mm³的小塊，所得剪碎的組織小塊用0.25％(質(zhì)量體積比)胰酶或100活性單位/mL?I型膠原酶溶液以1克：0.5mL的重量體積比消化30分鐘后，加入消化液溶液體積1/5的小牛血清終止，消化液過(guò)10μM細(xì)胞篩，并用5mL1×PBS(pH＝7.4)洗滌兩次，過(guò)濾后的溶液以1000rpm離心收集細(xì)胞沉淀，加入AIM-V培養(yǎng)基重懸至10mL，單細(xì)胞懸液經(jīng)連續(xù)密度梯度離心分離得到腫瘤浸潤(rùn)性T淋巴細(xì)胞和腫瘤細(xì)胞。

腫瘤細(xì)胞用AIM-V培養(yǎng)基液稀釋成細(xì)胞濃度為2×10⁶/mL的細(xì)胞懸液，分裝于凍存管，嚴(yán)密封口，用液氮行快速冷凍，室溫慢融，反復(fù)凍融3-5次，5000rpm離心10分鐘后取上清，加入到1.5mL離心管中制備成自體腫瘤抗原，于-80℃儲(chǔ)存，用于負(fù)載樹(shù)突狀細(xì)胞。

4.根據(jù)權(quán)利要求1至3中任一項(xiàng)所述的方法，其特征在于，所述自體腫瘤抗原負(fù)載的樹(shù)突狀細(xì)胞與腫瘤浸潤(rùn)性T淋巴細(xì)胞首先共培養(yǎng)5天，所述樹(shù)突狀細(xì)胞與淋巴細(xì)胞的用量比例為樹(shù)突狀細(xì)胞數(shù)∶淋巴細(xì)胞數(shù)＝1-10∶1，更優(yōu)選地，為樹(shù)突狀細(xì)胞數(shù)∶淋巴細(xì)胞數(shù)＝3∶1-5∶1。

共培養(yǎng)5天后，將腫瘤浸潤(rùn)性T淋巴細(xì)胞用5mL移液管吸出至新培養(yǎng)瓶中，并補(bǔ)充10-20mL新鮮淋巴細(xì)胞培養(yǎng)基(含50-500活性單位/mL白介素2)，在37℃、5％CO₂培養(yǎng)箱中繼續(xù)培養(yǎng)2-3天；繼續(xù)補(bǔ)充20-40mL新鮮細(xì)胞培養(yǎng)基(含50-500活性單位/mL白介素2)，在37℃、5％CO₂培養(yǎng)箱中繼續(xù)培養(yǎng)2-3天；然后腫瘤浸潤(rùn)性T淋巴細(xì)胞連續(xù)增殖培養(yǎng)到18-21天，使得細(xì)胞數(shù)達(dá)到5×10⁸以上。

5.根據(jù)權(quán)利要求1至4中任一項(xiàng)所述的方法，其特征在于，所述自體腫瘤抗原負(fù)載的樹(shù)突狀細(xì)胞，優(yōu)選地，加入到細(xì)胞培養(yǎng)板中使用包括強(qiáng)酸、強(qiáng)堿和/或輻照處理，將自體腫瘤抗原負(fù)載的樹(shù)突狀細(xì)胞作為滋養(yǎng)層細(xì)胞。

6.一種制備自體腫瘤浸潤(rùn)性T淋巴細(xì)胞的試劑盒，其特征在于，所述試劑盒包括：

A液為淋巴細(xì)胞培養(yǎng)基；

B液為GM-CSF和IL-4混合液；

C液為腫瘤壞死因子α溶液；

D液為白介素2溶液；

E液為組織消化液；

F液為淋巴細(xì)胞分離液；

G液為生理鹽水；

細(xì)胞培養(yǎng)板以及使用說(shuō)明書(shū)；

其中，所述使用說(shuō)明書(shū)包括權(quán)利要求3-5所述的方法。

試劑盒組分分裝：試劑盒規(guī)格為1次/盒，各組分的量為：A液500mL/1瓶，B液0.5mL/1支，C液0.5mL/1支，D液0.5mL/1支，E液1mL/1支，F(xiàn)液20ml/1瓶，G液100ml/1瓶；分裝后進(jìn)行包裝，得到自體腫瘤抗原負(fù)載的樹(shù)突狀細(xì)胞激活腫瘤浸潤(rùn)性T淋巴細(xì)胞的試劑盒。

經(jīng)培養(yǎng)獲得的自體腫瘤抗原負(fù)載的樹(shù)突狀細(xì)胞，優(yōu)選地，還包括強(qiáng)酸，強(qiáng)堿和/或輻照處理后自體腫瘤抗原負(fù)載的樹(shù)突狀細(xì)胞作為滋養(yǎng)層細(xì)胞的培養(yǎng)板，如24孔細(xì)胞培養(yǎng)板、12孔細(xì)胞培養(yǎng)板和6孔細(xì)胞培養(yǎng)板等。

7.根據(jù)權(quán)利要求6所述的試劑盒，其中，所述自體腫瘤抗原負(fù)載的樹(shù)突狀細(xì)胞，優(yōu)選地，還包括強(qiáng)酸，強(qiáng)堿和/或輻照處理后自體腫瘤抗原負(fù)載的樹(shù)突狀細(xì)胞作為滋養(yǎng)層細(xì)胞的培養(yǎng)板，如24孔細(xì)胞培養(yǎng)板、12孔細(xì)胞培養(yǎng)板和6孔細(xì)胞培養(yǎng)板等。

8.根據(jù)權(quán)利要求1-7中任一項(xiàng)所述的方法制備的腫瘤浸潤(rùn)性T淋巴細(xì)胞，可用于治療癌癥的藥物的制備中的應(yīng)用。