1.一種穿膜型的帶有熒光標(biāo)簽的TALEN-R11蛋白，其特征在于，所述的TALEN蛋白的L鏈和R鏈的N端分別帶有熒光蛋白EGFP和DesRed，TALEN蛋白的L鏈和R鏈的C端分別帶有穿膜肽R11，即為EGFP-TALEN-R11和DesRed-TALEN-R11蛋白。

2.根據(jù)權(quán)利要求所述的穿膜型的帶有熒光標(biāo)簽的TALEN-R11蛋白，其特征在于，所述的EGFP-TALEN-R11的堿基編碼如SEQ?ID?NO.1所示。

3.根據(jù)權(quán)利要求所述的穿膜型的帶有熒光標(biāo)簽的TALEN-R11蛋白，其特征在于，所述的DesRed-TALEN-R11的堿基編碼如SEQ?ID?NO.2所示。

4.權(quán)利要求1所述的穿膜型的帶有熒光標(biāo)簽的TALEN-R11蛋白的制備方法，其特征在于，依次包括下述方法：

1)載體的構(gòu)建

a)EGFP-TALEN-R11原核表達(dá)載體的構(gòu)建：

用核苷酸序列如SEQ?ID?NO.3所示的引物TALE-GFP_F：NdeI58和核苷酸序列如SEQ?ID?NO.4所示的引物GFP_R，擴(kuò)展質(zhì)粒pTALEN_v2的EGFP蛋白，回收PCR片段；然后用核苷酸序列如SEQ?ID?NO.5所示的引物GFP_F，核苷酸序列如SEQ?ID?NO.6所示的引物TALE_R1，核苷酸序列如SEQ?ID?NO.7所示的引物TALE_R2：BamHI擴(kuò)展TALE-ccdB-Chl片段；兩個(gè)片段融合后，克隆到原核表達(dá)載體PET-16b載體的NdeI和BamHI位點(diǎn)，得pET16b-EGFP-TALEN-R11原核表達(dá)載體；

b)DesRed-TALEN-R11原核表達(dá)載體的構(gòu)建：

用核苷酸序列如SEQ?ID?NO.8所示的引物TALE-DesRed_F：NdeI58和核苷酸序列如SEQ?ID?NO.9所示的引物DesRed_R擴(kuò)展粒pTALEN_v2的DesRed蛋白，回收PCR片段，然后用核苷酸序列如SEQ?ID?NO.10所示的引物DesRed_F，核苷酸序列如SEQ?ID?NO.6所示的引物TALE_R1，核苷酸序列如SEQ?ID?NO.7所示的引物TALE_R2：BamHI去擴(kuò)展TALE-ccdB-Chl片段，回收PCR片段；

兩個(gè)DNA片段融合，克隆到原核表達(dá)載體PET-16b載體的NdeI和BamHI位點(diǎn)，得核苷酸序列如SEQ?ID?NO.12所示pET16b-DesRed-TALEN-R11原核表達(dá)載體

2)EGFP-TALEN-R11蛋白和DesRed-TALEN-R11蛋白的表達(dá)與純化

步驟1制備的pET16b-EGFP-TALEN-R1原核表達(dá)載體與步驟2)制備的pET16b-DesRed-TALEN-R11原核表達(dá)載體同時(shí)轉(zhuǎn)化到大腸桿菌BL21中誘導(dǎo)，分別收集所得到的EGFP-TALEN-R11蛋白與DesRed-TALEN-R11蛋白菌體，離心獲得上清液，進(jìn)行Ni柱親和層析，待目的蛋白與Ni柱結(jié)合之后，先用漂洗液洗滌，之后用洗脫緩沖液沖洗，將洗脫組分中的高鹽緩沖液置換成PBS溶液，最后進(jìn)行SDS-PAGE的檢測(cè)，所得即為純化的EGFP-TALEN-R11蛋白與DesRed-TALEN-R11蛋白。

5.權(quán)利要求1所述的穿膜型的帶有熒光標(biāo)簽的TALEN-R11蛋白在敲除細(xì)胞內(nèi)源性基因中的應(yīng)用。

6.權(quán)利要求5所述的穿膜型的帶有熒光標(biāo)簽的TALEN-R11蛋白敲除細(xì)胞內(nèi)源基因的方法是將EGFP-TALEN-R11和DesRed-TALEN-R11原核表達(dá)載體與細(xì)胞孵育以敲除內(nèi)源性基因。

7.根據(jù)權(quán)利要求6所述的穿膜型的帶有熒光標(biāo)簽的TALEN-R11蛋白敲除細(xì)胞內(nèi)源基因的方法，其特征在于，所述的孵化是用培養(yǎng)基對(duì)EGFP-TALEN-R11蛋白和DesRed-TALEN-R11蛋白進(jìn)行不同濃度稀釋，再分別與C57BL/6J小鼠ES細(xì)胞在37℃孵育1小時(shí)，然后用完全培養(yǎng)基更換細(xì)胞培養(yǎng)液以去除EGFP-TALEN-R11蛋白和DesRed-TALEN-R11蛋白，再分別進(jìn)行37℃或者30℃的后續(xù)培養(yǎng)24小時(shí)，以此作為第一輪的蛋白處理，此過(guò)程重復(fù)兩次。