[發(fā)明專利]利用藥物松胞素B檢測(cè)淋巴細(xì)胞增殖的方法無效
| 申請(qǐng)?zhí)枺?/td> | 201410253026.7 | 申請(qǐng)日: | 2014-06-10 |
| 公開(公告)號(hào): | CN104017876A | 公開(公告)日: | 2014-09-03 |
| 發(fā)明(設(shè)計(jì))人: | 袁德曉;邵春林;張江虹;潘燕;白楊 | 申請(qǐng)(專利權(quán))人: | 復(fù)旦大學(xué) |
| 主分類號(hào): | C12Q1/68 | 分類號(hào): | C12Q1/68;C12Q1/02 |
| 代理公司: | 上海正旦專利代理有限公司 31200 | 代理人: | 陸飛;盛志范 |
| 地址: | 200433 *** | 國(guó)省代碼: | 上海;31 |
| 權(quán)利要求書: | 查看更多 | 說明書: | 查看更多 |
| 摘要: | |||
| 搜索關(guān)鍵詞: | 利用 藥物 松胞素 檢測(cè) 淋巴細(xì)胞 增殖 方法 | ||
1.?一種利用藥物松胞素B檢測(cè)淋巴細(xì)胞增殖的方法,其特征在于具體步驟為:
(1)取若干份健康人外周血,每份血分成照射組即增殖抑制組和非照射組;
(2)血樣用含PHA營(yíng)養(yǎng)液培養(yǎng):無菌操作將0.2-0.6ml血樣加入含有PHA營(yíng)養(yǎng)液小瓶?jī)?nèi),PHA終濃度為30-70μg/ml,混勻后,置于溫箱中培養(yǎng)1-2天;
(3)加入松胞素B繼續(xù)培養(yǎng):在含PHA營(yíng)養(yǎng)液中培養(yǎng)結(jié)束后,向培養(yǎng)液內(nèi)加入松胞素B,終濃度為2-6μg/ml,溫箱中繼續(xù)培養(yǎng)24-36h;
(4)溶解紅細(xì)胞:培養(yǎng)結(jié)束后,吸棄上清液,加入預(yù)溫的質(zhì)量濃度為0.87%?NH4Cl溶液3-5ml,置于溫箱中孵育10-15min;
(5)低滲處理:離心棄上清后每管細(xì)胞加入5-10ml?0.075M?KCl混勻,室溫低滲10-20min;
(6)固定液固定:采用兩步固定法,低滲后加入固定液固定,按體積比,固定液:低滲液=1:5-8,滴管混勻后立即離心,棄上清每管加入5-8ml固定液固定20-30min;所述固定液為甲醇和冰醋酸的混和液,兩者質(zhì)量比為甲醇:冰醋酸=7-9:1;
(7)檢測(cè)照射與非照射淋巴細(xì)胞的雙核率的差異,雙核率=雙核細(xì)胞數(shù)/N,N為觀察淋巴細(xì)胞個(gè)數(shù),N取500—1000;
上述步驟中,所述溫箱溫度為36℃-40℃,所述預(yù)溫溫度為36℃-40℃。
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