[發明專利]一種豬源產腸毒素大腸桿菌鞭毛蛋白3FliCon融合蛋白及其應用有效
| 申請號： | 201410024751.7 | 申請日： | 2014-01-20 |
| 公開（公告）號： | CN104789589B | 公開（公告）日： | 2018-01-09 |
| 發明（設計）人： | 彭健;潘中勉;蔣思文;王榮 | 申請（專利權）人： | 華中農業大學 |
| 主分類號： | C12N15/85 | 分類號： | C12N15/85;C12N1/15;C12N1/19;C12N1/21;C07K19/00;C07K16/12;C07K16/02;C07K1/14;A61P31/04 |
| 代理公司： | 武漢宇晨專利事務所42001 | 代理人： | 王敏鋒 |
| 地址： | 430070 湖*** | 國省代碼： | 湖北;42 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 種豬 源產腸 毒素 大腸桿菌 鞭毛 蛋白 flicon 融合 及其 應用 | ||
1.一種豬源ETEC3個拷貝基因fliC的重組質粒pRSET-3FliCon，其序列為SEQ ID NO.1所示。
2.含有權利要求1所述重組質粒的基因工程菌。
3.權利要求2所述基因工程菌表達的融合蛋白，其序列為SEQ ID NO.2所示。
4.利用權利要求3所述融合蛋白制備的血清抗體。
5.權利要求4所述的血清抗體在體外抑制大腸桿菌粘附中的應用。
6.利用權利要求3所述的融合蛋白制備的卵黃抗體。
7.權利要求6所述的卵黃抗體在制備抗豬源產腸毒素大腸桿菌免疫疫苗中的應用。
8.權利要求3所述的融合蛋白在制備抗腹瀉蛋類中的應用。
9.權利要求3所述融合蛋白的復性方法，其步驟如下：
接種菌株至300mL培養基中，誘導表達，從培養液中收集菌體，再重懸于預冷的30ml的BufferA中，壓力破碎儀破碎3-5次，離心保留沉淀，30ml BufferA重懸沉淀，緩慢加入10%SKL，不停攪拌至沉淀溶解，溶液澄清，4℃靜置2h，繼續加入終濃度0.2%的PEG4000、600μL氧化型谷胱甘肽與還原型谷胱甘肽，4℃靜置2h，10000rpm離心15min棄去未溶解的菌體雜質，即得；
所述的BufferA的配方：Tris 6.055g，EDTA 0.186g，NaCl 2.925g，甘油50mL，加入ddH2O定容至1L，使用前現加入DTT至終濃度0.5mmol/L；
所述的菌株為含有重組質粒pRSET-3FliCon的基因工程菌，pRSET-3FliCon序列為SEQ ID NO.1所示。
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