[發明專利]一種大黃魚頭腎細胞系及其構建方法有效
| 申請號: | 201310474258.0 | 申請日: | 2013-10-12 |
| 公開(公告)號: | CN103484425A | 公開(公告)日: | 2014-01-01 |
| 發明(設計)人: | 陳新華;敖敬群;王賢慧;王琨茹 | 申請(專利權)人: | 國家海洋局第三海洋研究所 |
| 主分類號: | C12N5/071 | 分類號: | C12N5/071;C12R1/91 |
| 代理公司: | 廈門南強之路專利事務所(普通合伙) 35200 | 代理人: | 馬應森 |
| 地址: | 361005 福*** | 國省代碼: | 福建;35 |
| 權利要求書: | 查看更多 | 說明書: | 查看更多 |
| 摘要: | |||
| 搜索關鍵詞: | 一種 大黃 魚頭 細胞系 及其 構建 方法 | ||
1.一種大黃魚頭腎細胞系,其特征在于為大黃魚頭腎細胞系LYCK,已于2013年8月13日保藏于中國典型培養物保藏中心,保藏編號為CCTCC?NO:C2013113。
2.如權利要求1所述一種大黃魚頭腎細胞系的構建方法,其特征在于包括以下步驟:
1)配制細胞培養基;
2)原代培養的建立;
3)傳代培養。
3.如權利要求2所述一種大黃魚頭腎細胞系的構建方法,其特征在于在步驟1)中,所述配制細胞培養基的方法為:取GIBCO公司的L-15培養基粉末,溶解后,抽濾,分裝,取少量做無菌測試,4℃保存,得基礎培養基;臨用前加入10%~20%的胎牛血清,雙抗,于4℃保存,得完全培養基。
4.如權利要求2所述一種大黃魚頭腎細胞系的構建方法,其特征在于在步驟2)中,所述原代培養的建立方法為:取3尾健康大黃魚,量體長,稱重,浸入75%的乙醇中,進行體表消毒和麻醉,立即解剖;在事先備好的玻璃瓶中加入2mL含有2×雙抗的L-15基礎培養基,先剪斷大黃魚脊椎,依次分離大黃魚的頭腎組織,放入步驟1)所得到的基礎培養基中清洗,至少漂洗3次,洗好后,在含基礎培養基的玻璃瓶內將頭腎組織剪成碎塊;去除基礎培養基,加入2mL胰酶消化15~20min,再加入含20%FBS和2×雙抗的L-15完全培養基終止消化反應;用無菌尼龍濾網過濾上述消化產物;1000~1500rpm離心10min,棄上清;加入L-15完全培養基重懸細胞沉淀,1000rpm再次離心10min,棄上清;加入完全培養基重懸細胞沉淀,并轉至25cm2細胞培養瓶中,補加完全培養基至5mL,28℃細胞培養箱中靜置培養;所述2×雙抗為青霉素200U/mL和鏈霉素0.2mg/mL。
5.如權利要求4所述一種大黃魚頭腎細胞系的構建方法,其特征在于所述在含基礎培養基的玻璃瓶內將頭腎組織剪成碎塊后形成糜狀。
6.如權利要求2所述一種大黃魚頭腎細胞系的構建方法,其特征在于在步驟3)中,所述傳代培養的方法為:細胞長成單層后,吸出培養基,加入PBS漂洗細胞,加入含有0.25%EDTA的胰蛋白酶進行消化,顯微鏡觀察下待細胞變圓即吸棄胰酶,加入新鮮培養基制備細胞懸液,一分為二接種至兩個培養瓶中,于28℃培養箱中培養。
7.如權利要求1所述一種大黃魚頭腎細胞系在各種大黃魚免疫相關功能基因研究中的應用。
8.如權利要求1所述一種大黃魚頭腎細胞系在細胞生物學、分子生物學、病毒學、毒理學、腫瘤學、遺傳學和免疫學研究中的應用。
該專利技術資料僅供研究查看技術是否侵權等信息,商用須獲得專利權人授權。該專利全部權利屬于國家海洋局第三海洋研究所,未經國家海洋局第三海洋研究所許可,擅自商用是侵權行為。如果您想購買此專利、獲得商業授權和技術合作,請聯系【客服】
本文鏈接:http://www.17sss.com.cn/pat/books/201310474258.0/1.html,轉載請聲明來源鉆瓜專利網。





