技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于生物化工技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種脫二氧喹烯酮半抗原及其制備方法和其應(yīng)用。

背景技術(shù)

喹烯酮(Quinocetone)分子式C₁₈H₁₄N₂O₃，屬喹噁啉類藥物，是中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院蘭州畜牧與獸藥研究所研制的畜禽抗菌、止瀉、促生長新藥，是我國在國際上首創(chuàng)的一類新獸藥。該類藥物對多種腸道致病菌（特別是革蘭氏陰性菌）有抑制作用，可明顯降低畜禽腹瀉發(fā)生率，促進(jìn)生長并提高飼料轉(zhuǎn)化率。目前包括我國在內(nèi)的許多國家和地區(qū)都廣泛用作動物飼料添加劑。喹烯酮在畜牧業(yè)上廣泛使用的同時，由于畜牧業(yè)生產(chǎn)者不熟悉藥物的理化性質(zhì)和藥理毒理特點(diǎn)，存在一定的濫用情況，導(dǎo)致畜產(chǎn)品中喹烯酮及其主要代謝產(chǎn)物脫二氧喹烯酮?dú)埩舫瑯?biāo)，對人們的身體健康造成嚴(yán)重的潛在危脅。同時由于動物性產(chǎn)品具有不易儲存、易變質(zhì)等特點(diǎn)，為了保障消費(fèi)者的身體健康，迫切需要建立一種快速、簡便、價廉、靈敏、特異的喹烯酮及其主要代謝產(chǎn)物脫二氧喹烯酮的篩選方法。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的是提供一種脫二氧喹烯酮半抗原及其制備方法和其應(yīng)用。

本發(fā)明提供的脫二氧喹烯酮半抗原具有式Ⅰ所示的化學(xué)結(jié)構(gòu)：

本發(fā)明提供的脫二氧喹烯酮半抗原的制備方法，包括下述步驟（1）和（2）：

（1）將乙酰甲喹和低亞硫酸鈉于60℃反應(yīng)2小時，即得3-甲基-2-乙酰喹噁啉；所述乙酰甲喹和低亞硫酸鈉的摩爾比為1:1.8；

（2）將3-甲基-2-乙酰喹噁啉和對甲酰苯甲酸在堿催化劑作用下，于40℃反應(yīng)12h，再室溫反應(yīng)過夜，即得脫二氧喹烯酮半抗原；所述3-甲基-2-乙酰喹噁啉和對甲酰苯甲酸的摩爾比為1:1.2。

所述步驟（1）中，需要先將乙酰甲喹在所述溶劑中溶解，再加入低亞硫酸鈉。

所述溶解為加熱溶解；具體為30℃加熱溶解。

所述步驟（2）中，所述室溫具體為25-27℃；所述反應(yīng)過夜具體為反應(yīng)12-14小時。

所述步驟（1）中，所述反應(yīng)在溶劑中進(jìn)行，所述溶劑為四氫呋喃、100%乙醇和蒸餾水的混合溶劑，所述四氫呋喃、100%乙醇和蒸餾水的體積比為2:10:1；所述步驟（2）中，所述反應(yīng)在溶劑中進(jìn)行，所述溶劑為四氫呋喃、乙醇和水的混合物；所述步驟（2）中，所述堿催化劑為氫氧化鈉。

所述步驟（1）中，所述反應(yīng)完畢后還包括濃縮過程和純化過程。

所述濃縮過程具體為于0.1MP、50℃條件下旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)移除所述溶劑。

所述純化過程具體為用蒸餾水和三氯甲烷萃取，干燥合并的有機(jī)相，移除溶劑即得。

所述純化過程中，所述蒸餾水和三氯甲烷的體積比為4：9；所述萃取具體為3次；所述干燥具體為用無水硫酸鈉干燥。

所述步驟（2）中，所述反應(yīng)完畢后還包括純化過程。

所述純化過程具體為過濾、產(chǎn)物依次用熱乙醇和熱丙酮清洗、干燥即得。

所述純化過程中，所述熱乙醇和熱丙酮指35℃的乙醇和丙酮；所述熱乙醇和熱丙酮的體積數(shù)分各為50ml；所述清洗具體為清洗3次；所述干燥具體為用無水硫酸鈉干燥。

本發(fā)明提供的脫二氧喹烯酮半抗原或由所述方法直接得到的脫二氧喹烯酮半抗原作為半抗原的用途。

所述用途中，所述作為半抗原的用途具體指用所述半抗原偶聯(lián)蛋白后免疫動物，可獲得針對喹烯酮代謝產(chǎn)物的特異性抗體；所述喹烯酮代謝產(chǎn)物具體指脫二氧喹烯酮。

本發(fā)明提供的脫二氧喹烯酮半抗原或由所述方法直接得到的脫二氧喹烯酮半抗原在檢測脫二氧喹烯酮中的用途。

本發(fā)明提供的脫二氧喹烯酮半抗原或由所述方法直接得到的脫二氧喹烯酮半抗原在制備檢測脫二氧喹烯酮產(chǎn)品中的用途。

本發(fā)明的另一個目的是提供一種抗原，為所述脫二氧喹烯酮半抗原或由所述方法直接得到的脫二氧喹烯酮半抗原與牛血清白蛋白的偶聯(lián)物。

本發(fā)明的還一個目的是提供一種多克隆抗體，所述多克隆抗體是將所述脫二氧喹烯酮半抗原或由所述方法直接得到的脫二氧喹烯酮半抗原與牛血清蛋白的偶聯(lián)物作為抗原免疫動物后獲得的。

本發(fā)明的再一個目的是提供一種特異性檢測脫二氧喹烯酮的試劑盒，所述試劑盒包括下述1）-9）：

1）碳酸鹽緩沖液：

Na₂CO₃????????1.59g/L

NaHCO₃????????2.93g/L

溶劑為蒸餾水；