1.一種基于磁分離-量子點免疫熒光傳感檢測生物大分子的方法，其特征在于，用超順納米磁珠MBs為載體經功能化修飾后與抗待測生物大分子的抗體Ab₁偶聯而制得捕獲抗體MB-Ab₁；將量子點經功能化修飾后與抗待測生物大分子的抗體Ab₂偶聯而制得量子點熒光探針QDs-Ab₂；利用MB-Ab₁從試樣中特異性富集待測生物大分子Ag，制得系列復合物MB-Ab₁-Ag；使MB-Ab₁-Ag與QDs-Ab₂反應形成MB-Ab₁-Ag-Ab₂-QDs，經磁分離使之與液相QDs-Ab₂免疫熒光探針分離；測量QDs-Ab₂熒光強度X，利用待測生物大分子濃度C與X之間呈現的反相關函數關系而實現傳感檢測待測生物大分子濃度；其步驟為，?

(1)超順納米磁珠MBs與抗體Ab₁的偶聯：?

a.超順納米磁珠的活化：取1-5mg顆粒直徑為100-2000nm、具有羧基的超順納米磁珠于1.5mL離心管中，通過磁分離，去掉上清液得到超順納米磁珠，加入100-1000μL磷酸鹽緩沖溶液，置于超聲波清洗器中超聲30s后放入渦旋振蕩器中振蕩10s，加入5-20μL濃度為50mg/mL的N-羥基硫代琥珀酰亞胺NHS和5-20μL濃度為50mg/mL的1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亞胺鹽酸鹽EDC，搖振20min；通過磁分離，去掉剩余的活化劑和副產物，再用pH＝7.4的PBS緩沖溶液洗滌，洗滌2-3次，再溶于100-1000μL上述PBS緩沖溶液，得到活化的超順納米磁珠懸浮液。?

b.抗體與活化的超順納米磁珠的偶聯：取80-100μL上述活化納米磁珠懸浮液于離心管中，加入蛋白含量為5-10mg/mL的Ab₁抗體0.3-0.5mg，搖振0.5-2h，通過磁分離去掉未反應物，再將磁珠溶于500-1000μL上述封閉液，反應半小時，再通過磁分離去掉上清液，加入200-1000μL洗滌液PBST重新溶解，在渦旋振蕩器中振蕩30s再進行磁分離，該洗滌步驟重復2次，再用1000μL的PBS溶液復溶，得到磁免疫親和富集試劑MB-Ab₁，保存于4℃冰箱中。?

(2)量子點QDs與抗待測生物大分子的抗體Ab₂的偶聯：?

a.量子點QDs的活化：取200-500μL表面修飾有羧基的量子點加入到1.5mL離心管中，置于超聲波清洗器中超聲30s后放入渦旋振蕩器中振蕩10s，再加入10-50μL質量濃度為5?mg/mL的NHS和10-50μL濃度為10mg/mL的1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亞胺鹽酸鹽，搖振10-20min進行活化。?

b.抗生物大分子抗體Ab₂與QDs的偶聯：將為蛋白含量5-10mg/mL的Ab₂抗體0.2-0.3mg加入到上述活化好的QDs懸浮液中，搖振0.5-2h，加入500-1000μL上述封閉液反應0.5h，用分子量為100kd的超濾離心管在離心力為8000g下離心15min，去掉下清液，用100-500μL的PBS溶液重溶QDs-Ab₂，用分子量為100kd的超濾離心管在離心力為8000g下離心15min，該步驟重復2-3次，最后用100-500μL的PBS溶液復溶QDs-Ab₂，制得QDs-Ab₂熒光免疫探針。?

(3)試樣中待測生物大分子Ag的富集：?

a.親和富集：取100μL上述MB-Ab₁溶液分別與1000μL不同濃度的待測生物大分子Ag混合于1.5mL離心管中，室溫下渦旋10-15min，經磁分離后用100μL上述磷酸鹽緩沖溶液復溶，制得系列復合物MB-Ab₁-Ag。?

(4)微孔板熒光檢測儀間接檢測試樣中待測生物大分子含量：?

a.免疫反應：分別取上述系列MB-Ab₁-Ag復合物100μL于96孔細胞培養板中，分別加入100μL上述QDs-Ab₂熒光免疫探針，于37℃下反應15min，經磁分離，使MB-Ab₁-Ag-Ab₂-QDs免疫復合物與液相QDs-Ab₂免疫熒光探針分離。?

b.免疫熒光定量分析：利用多功能熒光酶標儀分別對液相QDs-Ab₂免疫熒光探針進行熒光測定，其熒光強度X與待測生物大分子濃度C符合下列函數關系式，從而間接測得了待測生物大分子濃度。?

Lg[C]＝AX+B?

C：待測物的濃度；?

X：測得量子點熒光強度；?

A和B均為常數。?