技術領域

本發明涉及一種功能食品技術領域的制備方法，更確切地說，本發明涉及一種富硒羊肚菌多糖的制備方法。

背景技術

硒是人體必需的微量元素，它通過谷胱甘肽過氧化物酶、輔酶Q和維生素E維持自由基的正常代謝，以維持人體正常生理機能。硒的主要作用有以下幾個方面：防癌抗癌作用；抗氧化作用；增強免疫力；防止糖尿病；防止白內障；防止心腦血管疾病；防止克山病、大骨節病、關節炎；解毒、排毒；防治肝病、保護肝臟。

但是硒無法在體內合成,只能通過體外攝取。動物臟器和海產品中含有豐富的有機硒，但動物臟器中含有較多的膽固醇，特別不利于中老年人和心血管疾病患者；而海產品中硒的可利用性也很低，因為海產品中含有甲基汞，可以與硒結合成蛋白質－Ｓ－Se－汞，成為非活性狀態，汞的毒性消除了，硒的作用也被抵消了。因此，有機硒是人類最好的補硒來源。

近年來國內外都在致力于有機硒的開發和推廣，日本、美國等發達國家已經禁止在食品中添加亞硒酸鈉等無機硒。預計，有機硒必將取代亞硒酸鈉作為食品添加劑在食品加工中的使用。

多糖在生物體內不僅作為能源物質，更重要的是參與了細胞各種活動。很多藥理和臨床實驗證明，多糖具有多種生理活性，是一種廣譜的免疫促進劑，具有防癌抗癌、調節免疫功能、延緩衰老、抗感染、抗輻射等生理作用。

硒多糖的研究在國內外尚處于起步階段,但由于硒多糖獨特的生理活性,近年來已經成為研究熱點。

羊肚菌菌絲體均含有豐富的營養成分，其氨基酸含量為食用菌之首，共含有19種氨基酸，其中8種人體必需氨基酸占總量的47.47%，羊肚菌中對人體有益的亞油酸占脂肪酸總量的56%，是一種高營養低熱量的高級營養滋補佳品。但由于羊肚菌具有特殊的生物學特性,要實現羊肚菌商業化栽培困難極大,深層發酵法是一種工業化生產羊肚菌菌絲的重要途徑。

食用菌富集的有機態微量元素易于人體的吸收利用；且富集的微量元素穩定性良好，便于貯存、運輸，可以避免其中的某些營養成分損失；攝取的微量元素在限制范圍內，亦對人體無毒副作用。

目前利用食用菌為載體，通過施含硒肥料培育的富硒靈芝、富硒金針菇、富硒平菇、富硒香菇和富硒猴頭菌等，對硒的富集程度低、對無機硒的轉化程度低、食用菌多糖提取率低與純化程度低；并且國內外均未實現羊肚菌商業化栽培，同時也沒有利用深層發酵的方法獲取富硒羊肚菌多糖的報道。

發明內容

本發明所要解決的技術問題是克服了現有技術存在食用菌子實體對硒的富集程度低、對無機硒的轉化程度低、食用菌多糖提取率低與純化程度低的問題，提供了一種富硒羊肚菌多糖的制備方法。

為解決上述技術問題，本發明是采用如下技術方案實現的：所述的一種富硒羊肚菌多糖的制備方法的步驟如下：

1.富硒羊肚菌的制備

（1）制備培養基：

a.制備斜面培養基;

b.制備深層發酵培養基;

（2）菌種活化：

將所有器具通過紫外線殺菌30min后，在無菌環境下用接種環挑取保藏的粗柄羊肚菌926號，轉接到新鮮的斜面培養基上，在25℃恒溫培養箱中培養24h；

（3）深層發酵：

菌種活化后，取約5mm²大小的菌種10塊接入深層發酵培養基，同時加入的亞硒酸鈉，使深層發酵培養基中硒濃度達到80μg/ml，250mL三角瓶裝料100mL，置于振蕩培養箱中，培養溫度為26℃，振蕩培養箱的振蕩頻率100rpm，培養時間5天，得到富硒羊肚菌菌絲球。

2.富硒羊肚菌胞內粗多糖的提取

（1）富硒羊肚菌菌絲球經清洗、烘干、粉碎、過篩后稱量，按菌絲球與蒸餾水為1：30的比例加入蒸餾水，進行微波協同超聲波輔助提取，然后置于水浴鍋中，在90℃下熱水浸提140min，將浸提液以4000r/min的轉數在離心機中離心15min，取上清液；

（2）上清液經低溫濃縮后，在攪拌下加入3倍體積的95%乙醇，將醇析液在4℃冰箱中靜置12h，采用離心機分離收集沉淀物；

（3）將收集的沉淀物復溶于蒸餾水中，按樣品與Sevag試劑為5:1的比例充分混勻，置于分液漏斗中，靜置20min后棄去下層有機層及兩相界面上的蛋白質變性層，取上層液重復本步驟處理7～8次，直到有機層與水層間無白色膠狀物產生為止，此時上層液體為羊肚菌胞內粗多糖溶液；

（4）取上層羊肚菌胞內粗多糖溶液濃縮、醇沉后收集沉淀物，然后分別用無水乙醇、丙酮、乙醚洗滌2次，最后將沉淀物小心刮入稱量皿中，置于40℃真空干燥箱中干燥2h，即得到固態富硒羊肚菌胞內粗多糖。