一、技術領域

本發明涉及一種植物育種技術，特別涉及一種抗寒無核葡萄育種的方法。

二、背景技術

葡萄是世界上重要的水果，被廣泛應用于鮮食、釀酒、制干等方面，特別是無核葡萄食用方便，深受消費者的青睞，目前已成為國際消費的重要趨勢和生產發展的方向。生產上栽培的無核葡萄品種絕大多數屬于歐亞種葡萄，品質優良但抗寒性差，在我國北方地區冬季常發生凍害，嚴重時造成樹體死亡，凍害一直是制約我國北方地區葡萄生產發展的主要因子，在最低溫度低于-15℃的葡萄產區不得不進行樹體冬季埋土防寒，但繁重的冬季埋土與春季出土工作，不僅增加了生產成本投入，而且為沙塵暴的發生提供了條件，不利于我國葡萄產業的可持續發展和環境保護。因此，培育抗寒無核葡萄新品種是解決生產問題的根本。

我國是葡萄屬(Vitis)植物的原產地之一，野生葡萄資源十分豐富，其中山葡萄（Vitis?amurensis）是葡萄屬中最抗寒的種，可耐-40℃～-50℃的低溫，是極為寶貴的抗寒種質資源。利用野生葡萄資源自身的抗寒性，通過雜交育種是培育抗寒葡萄新品種的重要途徑。迄今為止，我國主要利用抗寒的野生葡萄與歐亞種葡萄有核品種雜交，選育出了抗寒有核釀酒品種。在具體的雜交育種實踐中，如果用抗寒的野生山葡萄做母本與歐亞種種子敗育型無核葡萄做父本雜交，由于山葡萄經濟性狀不佳且遺傳力很強，在雜種一代很難獲得品質優良且是無核的葡萄植株；如果以無核葡萄做母本雜交，由于無核葡萄不能形成種子，因而無法獲得雜種植株。因此，通過常規雜交途徑培育抗寒無核葡萄極其困難。1982年美國葡萄育種家D.W.?Ramming發明了無核葡萄胚挽救技術，他采用歐亞種種子敗育型無核葡萄品種間雜交，獲得了無核葡萄雜種，解決了無核葡萄不能做雜交母本的問題，提高了無核葡萄育種的效率，縮短育種時間4～5年，但歐亞種葡萄品種間雜交難于獲得抗寒性強的無核葡萄新品種。在通過一定的技術手段獲得雜種植株之后，加快新品種選育進程的方法就是對雜種植株進行早期鑒定篩選，以節省育種時間。不同葡萄種、株系、品種、雜種的抗寒性不同，葡萄植株受到低溫逆境時，植物體會發生一系列生理、生化變化以抵抗低溫危害，因而可以通過測定植物體內的相關抗寒指標來評價其抗寒性。對于植物抗寒性相關生理、生化指標的測定已有不少報道，但尚未見在葡萄抗寒育種中應用。此外，自上世紀90年代以來，分子標記技術迅速發展，分子標記輔助育種加快了對雜種的鑒定篩選，在實踐中取得了明顯的成效。利用分子標記技術如序列特異擴增區域（SCAR）技術檢測與目標性狀連鎖的分子標記，具有快速、簡便、成本低、不受季節的限制而在實驗室完成等優點，因而受到世界植物育種界的廣泛重視，但目前該技術還沒有廣泛應用于抗寒無核葡萄育種領域。

三、發明內容

本發明的目的是解決常規雜交育種中培育抗寒無核葡萄難度大、周期長、見效慢的問題，而公開一種抗寒無核葡萄育種的方法。

本發明技術研究人員在大量的實驗令人驚喜地中發現，采用適當的雜交組合、借助胚挽救技術、對雜種幼苗進行早期抗寒性鑒定和分子檢測無核性狀的綜合育種方法，能夠縮短抗寒無核葡萄育種時間，提高育種效率，加快育種進程。

本發明所述方法，培育出抗寒無核葡萄僅需約6年時間，與現有常規雜交育種培養抗寒葡萄技術相比（現有常規育種技術需大約10年時間），大大縮短了培育周期，縮短培育時間在4年以上，見效更快。

本發明采用的技術方案是：采用我國原產的極抗寒的野生山葡萄兩性花株系或雄株做父本，或極抗寒的野生山葡萄與歐亞種葡萄雜交F1抗寒優株做父本，以歐亞種種子敗育型無核葡萄品種做母本，進行雜交，在雜種幼胚敗育之前從果實中取出胚珠，將胚珠接種在培養基（ER培養基+水解絡蛋白500mg/L）上進行離體培育（胚挽救），60d后從胚珠中剝取裸胚在萌發培養基（WPM培養基+BA0.2mg/L）上培養成苗，獲得雜種植株；對雜種植株進行早期抗寒性的生理指標鑒定和無核性狀的分子鑒定，篩選出抗寒無核葡萄新種質，最后按照育種程序選育出抗寒無核葡萄新品種。

四、具體實施方式

1.?春季4月份當山葡萄（如黑龍江實生、雙優）及其雜種（如北醇）的花序上有5%的花開放時，采集花序帶回實驗室，剝出花冠及花藥置于干凈紙片上，于日光燈下干燥至花藥裂開，花粉散出。花粉經紗網過篩后，研磨至手觸摸有滑膩感，外觀如面粉狀，裝入滅菌后的醫用青霉素小瓶，封口，低溫干燥處貯藏備用。