1.一種抗寒無核葡萄育種的方法，其特征在于采用原產我國的極抗寒的野生山葡萄、或極抗寒的野生山葡萄與歐亞種葡萄雜交的F1抗寒優株做父本，以經濟性狀好的歐亞種葡萄種子敗育型無核品種做母本，進行田間人工雜交，36~60天后，采取幼小雜交胚珠進行離體培養，以獲得大量雜交后代胚挽救幼苗，對獲得的大量胚挽救幼苗后代進行早期抗寒性相關生理生化指標的測定和抗寒性綜合評價，并利用檢側葡萄無核基因的脫氧核糖核酸（DNA）探針進行無核性狀的分子檢測，以篩選出抗寒無核葡萄新種質，并最終選育出抗寒無核葡萄新品種。

2.按照權利要求1所述的抗寒無核葡萄育種的方法，其特征是采取以下具體實施方法：

春季4月份當山葡萄或其雜種的花序上有5%的花開放時，采集花序帶回實驗室，剝出花冠及花藥置于干凈紙片上，于日光燈下干燥至花藥裂開，花粉散出；花粉經紗網過篩后，研磨至手觸摸有滑膩感，外觀如面粉狀，裝入滅菌后的醫用青霉素小瓶，封口，低溫干燥處貯藏備用；

選擇母本為種子敗育型無核葡萄品種的植株上發育一致的的健壯花穗若干，于花前2～3d去雄，防止自花授粉，注意不要傷及柱頭，掐去穗尖，對花穗噴水以防止花粉污染和保持柱頭濕潤，立即套袋和掛牌標記；

當柱頭開始分泌水滴狀黏液時，用毛筆或脫脂棉蘸取少量步驟(1)所得花粉進行人工授粉，以24h為間隔，連續授粉3次；

以第一次授粉日期作為取材時期的第0天，在設定的花后日期摘取果穗，每個種子敗育型無核葡萄品種的最佳取材時期不同，采集的果穗帶回實驗室；

將帶有1~2cm果柄的果粒用剪刀剪下，放入紗網，于流水下沖洗30～45min；

將沖洗過的果粒置超凈工作臺上用75%乙醇浸泡30～60s，然后用無菌水沖洗3次，再將漿果放入0.1%升汞溶液中浸泡8～10min，用無菌水沖洗3～5次，最后用手術刀將果粒切開，從剖開的果粒中選取長度大于2mm的胚珠，將其培養在ER+CH500mg/L的固液雙層培養基中，每個三角瓶內接種20個胚珠，在培養室內25±1℃中暗培養60d；

在解剖鏡下剖開胚珠，在胚珠內的喙端發現的白色胚即為發育胚，將發育胚接種到WPM+BA0.2mg/L培養基上，培養室溫度為25±1℃，光照2000～2500lx，12～14h，幼胚在培養基上萌發成苗；

對每一成苗的雜種單株剪取單芽莖段，插入1/2MS+IBA0.2mg/L培養基上繼代擴繁，獲得3～4株生根的試管苗；

第二年春季3月份對擴繁的試管苗在培養室內、25±1℃下，加強光照3000lx，14～16h，培養1周；

在超凈工作臺上取出試管苗，用無菌水洗去根部的培養基，栽入經高壓滅菌后的營養基質為蛭石：腐殖質土=1:1的營養缽中，澆透1/10MS+IBA0.05mg/L的營養液，用一次性透明塑料杯罩住苗子保濕，置于煉苗室內煉苗，溫度25±1℃，弱光下培養；

1周后澆透0.1%的多菌靈溶液一次；2周后再澆透一次1/10MS+IBA0.05mg/L的營養液，并逐漸打開塑料杯下部，使塑料杯內濕度逐漸下降；3周后再澆透0.1%的多菌靈溶液一次，光照提高至2000～2500lx；4周時去除塑料杯，并根據情況澆水；5周時可將營養缽置于田間塑料大棚內培養，注意控制棚內溫度不高于30℃,2～3天澆一次水；6～7周時將苗子從營養缽中取出，定植于大棚中的土壤中，澆透水；

加強肥水管理，當苗子長到50cm高時摘心，促其加粗生長；隨后對長出的付稍多次摘心；8～9月份注意增加磷鉀肥的施用；

在6～10月份可采取每個植株的幼葉，提取DNA，以無核基因探針GSLP1進行PCR擴增，以檢測是否擁有無核基因的SCAR標記GSLP1-569，并對檢測結果進行記錄；

在11月上旬當大棚內溫度降至4℃左右時，采取每個植株的葉片若干枚，帶回實驗室，分別測定其電導率、可溶性糖、可溶性蛋白、脯氨酸、丙二醛的含量共5項指標，同時測定山葡萄黑龍江實生作為高抗寒對照；?

利用隸屬函數法綜合評價每個雜種植株的抗寒性；

選出擁有無核基因SCAR標記GSLP1-569且為抗寒的植株，即是希望獲得的抗寒無核單株。

3.權利要求2所述的方法，其中步驟(2)中種子敗育型無核葡萄品種選自無核白、火焰無核、紅寶石無核、紅無籽露或波爾萊特。