[發明專利]生產分泌型多肽的方法有效
| 申請號: | 201280014578.1 | 申請日: | 2012-03-22 |
| 公開(公告)號: | CN103443278B | 公開(公告)日: | 2017-07-04 |
| 發明(設計)人: | S·T·約根森;A·布魯納 | 申請(專利權)人: | 諾維信公司 |
| 主分類號: | C12N15/62 | 分類號: | C12N15/62;C12N15/75;C12P1/04 |
| 代理公司: | 北京尚誠知識產權代理有限公司11322 | 代理人: | 龍淳,顧小曼 |
| 地址: | 丹麥,*** | 國省代碼: | 暫無信息 |
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| 摘要: | |||
| 搜索關鍵詞: | 生產 分泌 多肽 方法 | ||
1.一種生產分泌型多肽的方法,包括:
(a)在有益于生產所述多肽的介質中培養革蘭氏陽性宿主細胞,其中所述宿主細胞包含核酸構建體,所述核酸構建體包含與編碼所述多肽的第二核苷酸序列可操作地連接的編碼信號肽的第一核苷酸序列,其中所述第一核苷酸序列對于所述第二核苷酸序列為外源,所述第一核苷酸序列的3'端緊接在所述第二核苷酸序列的上游,所述第一核苷酸序列是對以下信號肽進行編碼的核苷酸序列,所述信號肽的氨基酸序列如SEQ ID NO:1所示;以及任選地
(b)從培養介質中分離所分泌的多肽。
2.根據權利要求1所述的方法,其中所述第一核苷酸序列由SEQ ID NO:10的575~661位組成。
3.根據權利要求1或2所述的方法,其中所述第二核苷酸序列編碼對于所述宿主細胞為內源的多肽。
4.根據權利要求1或2所述的方法,其中所述第二核苷酸序列編碼對于所述宿主細胞為異源的多肽。
5.根據權利要求1或2所述的方法,其中所述宿主細胞包含一個或多個所述第二核苷酸序列的拷貝。
6.根據權利要求1或2所述的方法,其中所述第二核苷酸序列編碼激素或激素變體、酶、受體或其部分、抗體或其部分、過敏原或報告子。
7.根據權利要求6所述的方法,其中所述酶是氧化還原酶、轉移酶、水解酶、裂解酶、異構酶或連接酶。
8.根據權利要求7所述的方法,其中所述酶是淀粉酶、糖酶、纖維素酶、幾丁質酶、酯酶、轉化酶、脂肪酶、果膠酶、過氧化物酶、磷脂酶、植酸酶、多酚氧化酶、蛋白水解酶、核糖核酸酶、谷氨酰胺轉胺酶。
9.根據權利要求8所述的方法,其中所述酶是漆酶。
10.根據權利要求8所述的方法,其中所述蛋白水解酶是氨基肽酶或羧肽酶;所述過氧化物酶是過氧化氫酶或氧化酶;所述酯酶是角質酶;所述淀粉酶是環糊精葡萄糖基轉移酶或葡糖淀粉酶;所述纖維素酶是纖維二糖水解酶、內切葡聚糖酶、α-葡糖苷酶或β-葡糖苷酶;所述核糖核酸酶是脫氧核糖核酸酶;所述糖酶是α-半乳糖苷酶、β-半乳糖苷酶、甘露糖苷酶、木聚糖酶、β-木糖苷酶或變聚糖酶。
11.根據權利要求1或2所述的方法,其中所述革蘭氏陽性細菌宿主細胞是芽孢桿菌屬、梭菌屬、腸球菌屬、地芽孢桿菌屬、乳桿菌屬、乳球菌、海洋芽胞桿菌屬、葡萄球菌屬、鏈球菌屬或鏈霉菌屬的細胞。
12.根據權利要求11所述的方法,其中所述革蘭氏陽性宿主細胞是芽孢桿菌細胞。
13.根據權利要求12所述的方法,其中所述芽孢桿菌屬宿主細胞為嗜堿芽孢桿菌、解淀粉芽孢桿菌、短芽孢桿菌、環狀芽胞桿菌、克勞氏芽孢桿菌、凝結芽孢桿菌、堅強芽孢桿菌、燦爛芽胞桿菌、遲緩芽孢桿菌、地衣芽胞桿菌、巨大芽胞桿菌、短小芽孢桿菌、嗜熱脂肪芽孢桿菌、枯草芽孢桿菌或蘇云金芽孢桿菌的細胞。
14.一種核酸構建體,包含與編碼多肽的第二核苷酸序列可操作地連接的編碼信號肽的第一核苷酸序列,其中所述第一核苷酸序列對于所述第二核苷酸序列為外源,所述第一核苷酸序列的3'端緊接在所述第二核苷酸序列的上游,所述第一核苷酸序列是對以下信號肽進行編碼的核苷酸序列,所述信號肽的氨基酸序列如SEQ ID NO:1所示。
15.根據權利要求14所述的核酸構建體,其中所述第一核苷酸序列由SEQ ID NO:10的575~661位組成。
16.一種重組表達載體,包含權利要求14或15所述的核酸構建體。
17.一種重組宿主細胞,包含權利要求14或15所述的核酸構建體或權利要求16所述的表達載體。
18.信號肽用于在革蘭氏陽性宿主細胞中生產多肽的用途,其中所述信號肽由第一核苷酸序列編碼,且所述多肽由對于所述第一核苷酸序列為外源的第二核苷酸序列編碼,所述第一核苷酸序列的3'端緊接在所述第二核苷酸序列的上游,其中所述第一核苷酸序列是對以下信號肽進行編碼的核苷酸序列,所述信號肽的氨基酸序列如SEQ ID NO:1所示。
19.根據權利要求18所述的用途,其中所述第一核苷酸序列是SEQ ID NO:10的575~661位所示的核苷酸序列。
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