本申請是申請?zhí)枮椤?01010192680.3”、申請日為“2010年06月04日”、發(fā)明名稱為“禽流感病毒及用于檢測、預防禽流感病毒的試劑盒和疫苗”的分案申請。

技術領域：

本發(fā)明屬于生物技術領域,涉及三種H9N2禽流感病毒的新毒株及用于檢測、預防禽流感病毒的試劑盒和疫苗。

背景技術：

禽流感(Avian?influenza，AI)是由A型流感病毒引起的一種嚴重危害禽類健康的傳染性疾病。禽類感染禽流感病毒(Avian?influenza?virus,AIV)后,癥狀可表現(xiàn)為非顯性感染、亞臨診感染,或輕度呼吸道疾病、產蛋量降低直至急性全身致死性疾病等多種形式。根據(jù)AIV對易感雞致病性的差異,可將AIV分為高致病性AIV和低致病性AIV。高致病性AIV(HPAIV)感染禽類所導致的禽流感對養(yǎng)禽業(yè)具有毀滅性的打擊,故被國際獸疫局規(guī)定為A類疾病;而一些低致病性AIV，如H9AIV的感染雖然對感染禽的致死率低,但可引起產蛋量的減少和淘汰率的上升,并造成免疫抑制,引起其他疫病的發(fā)生或混合感染，對養(yǎng)禽業(yè)造成的經濟損失也相當可觀。因此,AI一直是威脅世界養(yǎng)禽業(yè)的主要疾病之一，世界各國都十分重視對AIV的研究工作。已有研究表明來自于禽類的H9N2禽流感病毒能偶爾從禽類傳染給哺乳動物，包括人和豬。Ck/Bei-like和G1-like?H9N2禽流感病毒在1990底首次從人和豬中分離到。2003年分離到的人H9N2禽流感病毒是一個新的重組體，很可能來源于當?shù)氐幕钋菔袌觥＿@種跨種間傳播表明目前的H9N2禽流感病毒對人仍有潛在的感染性。AIV存在著廣泛的抗原漂移和抗原轉變現(xiàn)象,其抗原變異頻率很高。因此測定AIV的全基因序列，對于研究禽流感病毒的檢測、分布、流行規(guī)律以及控制禽流感的流行、蔓延均具有重要的意義。本研究分離鑒定了2002-2008年上海地區(qū)活禽市場的H9N2亞型禽流感病毒，經全基因序列測定分為三種基因型，對這三種基因型毒株的8個基因片段進行關鍵位點的分析以及基因進化關系分析，表明這三種基因型與目前報道的基因型存在差異，為H9N2禽流感病毒Ck/Bei系中的三種新的基因型，分別命名為Y1,Y2,Y3。

發(fā)明內容：

本發(fā)明提供了三種H9N2禽流感病毒及用于檢測、預防禽流感病毒的試劑盒和疫苗，所述的這三種H9N2禽流感病毒及用于檢測、預防禽流感病毒的試劑盒和疫苗要解決現(xiàn)有技術中無法確認和預防新的禽流感病毒從而導致新的禽流感疫情在禽類或者人類傳播的技術問題。

本發(fā)明提供了一種分離的禽流感病毒（Y1），其基因組由SEQ?ID?NO：1、SEQ?ID?NO：2、SEQ?ID?NO：3、SEQ?ID?NO：4、SEQ?ID?NO：5、SEQ?ID?NO：6、SEQ?ID?NO：7和SEQID?NO：8所示的RNA片段組成。

本發(fā)明還提供了一種分離的禽流感病毒，其保藏號為CGMCC?NO：3117。

本發(fā)明還提供了一種用于檢測上述的分離的禽流感病毒的試劑盒，含有上述的分離的禽流感病毒的RNA抽提液、RT反轉錄反應液和含有引物的PCR反應液，所述的PCR反應液中的引物為：

HA基因上游引物P1:5’-CAGGGGAATTTCACAACCAGTCAAA-3’，

下游引物P2:5’-GCCAGGGTGTTTTTGCCAATTATATAC-3’；

M基因上游引物P1：5’-AAGATGAGCCTTCTAACCGAGGTC-3’，

下游引物P2:5’-CGGGGTAGTTTTTTACTCCAGCTCTATG-3’；

NA基因上游引物P1：5’-AGCAGGAGTGAAAATGAATCCA-3’，

下游引物P2:5’-AATTGCGAGAGCTTATATAGGC-3’；

NP基因上游引物P1：5’-ATCATGGCGTCTCAAGGCACCAAA-3’，

下游引物P2:5’-GCCTCTTTAATTGTCATACTCCCCTGC-3’；

NS基因上游引物P1：5’-ACATAATGAACTCCAACACTGTGTC-3’，

下游引物P2:5’-GCAAATAAGCTGAAACGAGAAAGTTC-3’；

PA基因上游引物P1：5’-AAATGGAAGACTTTGTGCGACAATG-3’，

下游引物P2:5’-ACAACTATCTCAGTGCATGTGTGAG-3’；