[發(fā)明專利]用于測(cè)定肝素及其鹽相對(duì)分子量及分子量分布的對(duì)照品無(wú)效
| 申請(qǐng)?zhí)枺?/td> | 201210525272.4 | 申請(qǐng)日： | 2012-12-10 |
| 公開(kāi)（公告）號(hào)： | CN103018364A | 公開(kāi)（公告）日： | 2013-04-03 |
| 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人： | 崔慧斐;趙娜;曹吉超 | 申請(qǐng)（專利權(quán)）人： | 山東大學(xué) |
| 主分類號(hào)： | G01N30/02 | 分類號(hào)： | G01N30/02 |
| 代理公司： | 濟(jì)南圣達(dá)知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理有限公司 37221 | 代理人： | 彭成 |
| 地址： | 250014 山*** | 國(guó)省代碼： | 山東;37 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關(guān)鍵詞： | 用于 測(cè)定 肝素 及其 相對(duì) 分子量 分布 對(duì)照 | ||
1.一種用于測(cè)定肝素及其鹽相對(duì)分子量及分子量分布的對(duì)照品，其特征在于：由肝素鈉及其分子量寬分布標(biāo)樣表構(gòu)成，肝素鈉為固體形式，其經(jīng)HPSEC-MALLS測(cè)定的分子量范圍是3000～40000。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的用于測(cè)定肝素及其鹽相對(duì)分子量及分子量分布的對(duì)照品，其特征在于：所述對(duì)照品的平均分子量在15000～20000。
3.權(quán)利要求1或2所述的用于測(cè)定肝素及其鹽相對(duì)分子量及分子量分布的對(duì)照品的制備方法，其特征在于：步驟如下：
（1）選擇若干批注射級(jí)肝素鈉原料藥，利用HPSEC-MALLS分別測(cè)定其分子量及分子量分布，從中選擇分子量在3000～40000的肝素樣品作為對(duì)照品；
（2）分子量寬分布標(biāo)樣表的制作：根據(jù)上述HPSEC-MALLS獲得的肝素分子量累計(jì)分布圖，制作肝素對(duì)照品寬分布標(biāo)樣表。
4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的制備方法，其特征在于：所述步驟（1）中，HPSEC-MALLS的色譜條件如表1所示：
表1
。
5.根據(jù)權(quán)利要求3所述的制備方法，其特征在于：所述步驟（2）中，肝素對(duì)照品寬分布標(biāo)樣表的具體制作方法為：根據(jù)步驟（1）選定的肝素對(duì)照品的分子量范圍，從MALLS測(cè)定的最小分子量開(kāi)始，到分子量累積百分比為99%的分子量為止，根據(jù)分子量分布累積百分比取5～20個(gè)點(diǎn)，分別讀出其對(duì)應(yīng)的分子量，建立起肝素分子量-累積面積百分比的對(duì)應(yīng)表，即肝素對(duì)照品寬分布標(biāo)樣表。
6.權(quán)利要求1或2所述的用于測(cè)定肝素及其鹽相對(duì)分子量及分子量分布的對(duì)照品在測(cè)定肝素供試品的相對(duì)分子量及分子量分布中的應(yīng)用。
7.一種測(cè)定肝素供試品的相對(duì)分子量及分子量分布的方法，其特征在于：步驟如下：
（1）選擇若干批注射級(jí)肝素鈉原料藥，利用HPSEC-MALLS分別測(cè)定其分子量及分子量分布，從中選擇分子量在3000～40000、平均分子量在15000～20000的肝素樣品作為對(duì)照品；
（2）分子量寬分布標(biāo)樣表的制作：根據(jù)上述HPSEC-MALLS獲得的肝素分子量累計(jì)分布圖，制作肝素對(duì)照品寬分布標(biāo)樣表，即肝素分子量與其色譜峰累積面積百分比的對(duì)應(yīng)表；
（3）對(duì)肝素供試品進(jìn)行HPSEC測(cè)定，并計(jì)算相對(duì)分子量及分子量分布，以進(jìn)行質(zhì)量控制：
①HPSEC分析：分別對(duì)上述對(duì)照品及肝素供試品進(jìn)行HPSEC分析，得色譜圖；
②分子量校正曲線的制備：根據(jù)步驟（2）制作的對(duì)照品的寬分布標(biāo)樣表，從HPSEC測(cè)定的肝素對(duì)照品的色譜圖依次讀出相應(yīng)特征色譜峰累積峰面積百分比所對(duì)應(yīng)的保留時(shí)間，并以這一系列保留時(shí)間對(duì)其在寬分布標(biāo)樣表中對(duì)應(yīng)分子量的對(duì)數(shù)值進(jìn)行3次曲線方程擬合，得到校正曲線；
③利用上述得到的校正曲線，將供試品的保留時(shí)間代入該校正曲線，對(duì)供試品的色譜圖中的肝素色譜峰進(jìn)行積分，即可獲得供試品的相對(duì)分子量和分子量分布。
8.根據(jù)權(quán)利要求7所述的測(cè)定方法，其特征在于：所述步驟（1）中，HPSEC-MALLS的色譜條件如表1所示：
表1
。
9.根據(jù)權(quán)利要求7所述的測(cè)定方法，其特征在于：所述步驟（2）中，肝素對(duì)照品寬分布標(biāo)樣表的具體制作方法為：根據(jù)步驟（1）選定的肝素對(duì)照品的分子量范圍，從MALLS測(cè)定的最小分子量開(kāi)始，到分子量累積百分比為99%的分子量為止，根據(jù)分子量分布累積百分比取5～20個(gè)點(diǎn)，分別讀出其對(duì)應(yīng)的分子量，建立起肝素分子量-累積面積百分比的對(duì)應(yīng)表，即肝素對(duì)照品寬分布標(biāo)樣表。
10.根據(jù)權(quán)利要求7所述的測(cè)定方法，其特征在于：所述步驟（3）①中，HPSEC分析的色譜條件如表2所示：
表2
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