1.適冷宿主菌菌株SM20429的自主復制型表達載體pEV，核苷酸序列如SEQ?ID?NO.1所示。

2.權利要求1所述適冷宿主菌菌株SM20429的自主復制型表達載體pEV的構建方法，其特征在于，步驟如下:

1）以質粒pKNG101為模板，利用EasyTaq?DNA?Polymerase進行PCR擴增，經回收，制得質粒pKNG101的DNA片段，PCR擴增引物序列如下：

OriT1：5’-GCCAGCTCGTCGGTGTAGCT-3’，

RK2：5’-CAACAACGTTGCCCGGATCG-3’，

2）將步驟1）制得的質粒pKNG101的DNA片段和載體pGEM-T?Easy的混合液4μl、5μl連接緩沖液、1μl連接酶混合后，16℃連接過夜，得質粒；

3）以質粒pWD為模板，利用Pfu?DNA?Polymerase進行PCR擴增，PCR擴增引物序列如下：

ZF：5’-AACTGCAGCAAGACACTGTGAAGG-3’，

CMR：5’-GGACTAGTGAAGCACACGGTCACACTG-3’，

經純化回收后，用限制性內切酶ApeI和PstI雙酶切處理，回收酶切DNA片段，然后插入到同樣經限制性內切酶SpeI和PstI雙酶切處理后的步驟2）制得的質粒中，制得pOriT-4CM質粒；

4）人工合成含有木聚糖酶啟動子、多克隆位點和His-tag及終止密碼子的DNA片段，在片段的兩端引入SphI和NotI識別位點；用限制性內切酶SphI和NtI雙酶切處理，經純化回收后，插入到同樣經限制性內切酶SphI和NotI雙酶切處理的步驟3）制得的pOriT-4CM質粒中，制得自主復制型表達載體pEV。

3.如權利要求1所述的構建方法，其特征在于，所述步驟4）中含有木聚糖酶啟動子、多克隆位點和His-tag的DNA片段制備步驟如下：

選取Pseudoalteromonas?sp.BSi20429的木聚糖酶基因起始密碼子前200bp的DNA序列其后緊跟4個限制性內切酶序列，His標簽和終止密碼子，人工合成這段DNA片段并在片段兩端引入SphI和NotI識別位點。

4.權利要求1所述適冷宿主菌菌株SM20429的自主復制型表達載體pEV在表達適冷纖維素酶中的應用。