[發(fā)明專利]一種蚓激酶的制備方法有效
| 申請?zhí)枺?/td> | 201210494557.6 | 申請日: | 2012-11-27 |
| 公開(公告)號: | CN102925421A | 公開(公告)日: | 2013-02-13 |
| 發(fā)明(設(shè)計(jì))人: | 白鶴松;董文超;劉瑞;楊成博;田艷維 | 申請(專利權(quán))人: | 天津蚓福生物科技開發(fā)有限公司 |
| 主分類號: | C12N9/68 | 分類號: | C12N9/68 |
| 代理公司: | 天津市北洋有限責(zé)任專利代理事務(wù)所 12201 | 代理人: | 陸藝 |
| 地址: | 300454 天津市*** | 國省代碼: | 天津;12 |
| 權(quán)利要求書: | 查看更多 | 說明書: | 查看更多 |
| 摘要: | |||
| 搜索關(guān)鍵詞: | 一種 激酶 制備 方法 | ||
1.一種蚓激酶的制備方法,其特征是包括如下步驟:
(1)冷凍蚯蚓解凍,加入所述蚯蚓質(zhì)量3-5倍的體積濃度為50%-95%的乙醇水溶液,調(diào)節(jié)pH=5.5-6.5,閃式提取2min-5min;
(2)采用離心機(jī)對步驟(1)獲得的提取液進(jìn)行分離得到沉淀1和上清液1;
(3)向步驟(2)分離得到的沉淀1中加入所述沉淀1質(zhì)量3-5倍的去離子水,調(diào)節(jié)pH=7.0-7.5,閃式提取2min-5min,離心分離,得到上清液2;
(4)向上清液2中,加入所述上清液2質(zhì)量15%-25%的質(zhì)量濃度為0.1%-0.5%的聚丙烯酸鈉水溶液,調(diào)節(jié)pH=6.5-7.5,攪拌15-30min,離心分離,得到上清液3;
(5)向上清液3中加硫酸銨,使硫酸銨在上清液3中的質(zhì)量濃度為17%-23%,調(diào)節(jié)pH=6.5-7.5,離心分離,得到上清液4;
(6)向上清液4中補(bǔ)加硫酸銨,使硫酸銨在上清液4中的質(zhì)量濃度為50%-70%,調(diào)節(jié)pH=5.5-6.5;離心分離得到沉淀2;
(7)向沉淀2中加入所述質(zhì)量2-4倍的去離子水溶解,用新型重金屬離子去除劑TMTH-15調(diào)節(jié)pH=8.5-9.5,離心得到上清液5;
(8)將上清液5進(jìn)行超濾濃縮,以除去上清液5中的硫酸銨,得到超濾濃縮液;
(9)調(diào)節(jié)超濾濃縮液pH=7-7.5;冷凍干燥,得到蚓激酶。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種蚓激酶的制備方法,其特征是所述步驟(1)為:冷凍蚯蚓解凍,加入所述蚯蚓質(zhì)量4倍的體積濃度為75%的乙醇水溶液,調(diào)節(jié)pH=6.0,閃式提取3min。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種蚓激酶的制備方法,其特征是所述步驟(3)為:向步驟(2)分離得到的沉淀中加入所述沉淀質(zhì)量4倍的去離子水,調(diào)節(jié)pH=7.3,閃式提取3min,離心分離,得到上清液2。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種蚓激酶的制備方法,其特征是所述步驟(4)為:向上清液2中,加入所述上清液2質(zhì)量20%的質(zhì)量濃度為0.3%的聚丙烯酸鈉水溶液,調(diào)節(jié)pH=7.0,攪拌20min,離心分離,得到上清液3。
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種蚓激酶的制備方法,其特征是所述步驟(5)為:向上清液3中加硫酸銨,使硫酸銨在上清液3中的質(zhì)量濃度為20%,調(diào)節(jié)pH=7.0,離心分離,得到上清液4。
6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種蚓激酶的制備方法,其特征是所述步驟(6)為:向上清液4中補(bǔ)加硫酸銨,使硫酸銨在上清液4中的質(zhì)量濃度為60%,調(diào)節(jié)pH=6.0;離心分離得到沉淀2。
7.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種蚓激酶的制備方法,其特征是所述步驟(7)為:向沉淀2中加入所述質(zhì)量3倍的去離子水溶解,用新型重金屬離子去除劑TMTH-15調(diào)節(jié)pH=9.0,離心得到上清液5。
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