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[發明專利]淡紫醌霉素及其甲酯的制備方法有效

專利信息
申請號: 201210376355.1 申請日: 2012-09-28
公開(公告)號: CN102994585A 公開(公告)日: 2013-03-27
發明(設計)人: 林雙君;鄧子新;徐飛 申請(專利權)人: 上海交通大學
主分類號: C12P17/18 分類號: C12P17/18;C12R1/465
代理公司: 上海漢聲知識產權代理有限公司 31236 代理人: 郭國中;牛山
地址: 200240 *** 國省代碼: 上海;31
權利要求書: 查看更多 說明書: 查看更多
摘要:
搜索關鍵詞: 淡紫 霉素 及其 制備 方法
【權利要求書】:

1.一種淡紫醌霉素的制備方法,其特征在于,包括如下步驟:

A、以鏈黑菌素原始產生菌柔毛鏈霉菌Streptomyces?flocculus?CGMCC4.1223為出發菌株,克隆得到鏈黑菌素生物合成基因簇;

B、對所述鏈黑菌素生物合成基因簇中的雙氧化酶stnBl基因進行選擇性失活,獲得stnBl基因失活突變菌株ΔstnBl;

C、對所述突變菌株ΔstnBl進行發酵,將發酵液離心,離心后的濾液調整pH值至9~10,用不溶于水的中等極性有機溶劑A反復萃取,取水相濾液;

D、調整所述水相濾液pH值至4~5,用所述不溶于水的中等極性有機溶劑A反復萃取,收集中等極性有機溶劑相B,濃縮得到粗提物B,對所述粗提物B進行純化,即得。

2.如權利要求1所述的淡紫醌霉素的制備方法,其特征在于,所述不溶于水的中等極性有機溶劑A為乙酸乙酯、乙醚、氯仿或正丁醇。

3.如權利要求1所述的淡紫醌霉素的制備方法,其特征在于,步驟C中,所述不溶于水的中等極性有機溶劑A與離心后的濾液的體積比為1:3~2:1。

4.如權利要求1所述的淡紫醌霉素的制備方法,其特征在于,步驟D中,所述不溶于水的中等極性有機溶劑A與水相濾液的體積比為1:3~2:1。

5.如權利要求1所述的淡紫醌霉素的制備方法,其特征在于,步驟D中,所述純化為:用pH值為11~13的堿性水溶液溶解所述粗提物B并離心,收集上清液;向上清液中滴加鹽酸至出現沉淀;離心棄去上清,沉淀凍干后加入乙腈溶解,經半制備性PHLC,以乙腈水溶液洗脫,接收對應的吸收峰,合并餾分后放置-20℃以下,待有沉淀析出后低溫離心,棄去上清,凍干沉淀,即得所述淡紫醌霉素。

6.如權利要求5所述的淡紫醌霉素的制備方法,其特征在于,所述乙腈水溶液中乙腈的體積濃度為20%~100%。

7.如權利要求5所述的淡紫醌霉素的制備方法,其特征在于,所述堿性水溶液為0.1~1M?NaOH溶液。

8.一種淡紫醌霉素甲酯的制備方法,其特征在于,包括如下步驟:

A、以鏈黑菌素原始產生菌柔毛鏈霉菌Streptomyces?flocculus?CGMCC4.1223為出發菌株,克隆得到鏈黑菌素生物合成基因簇;

B、對所述鏈黑菌素生物合成基因簇中的雙氧化酶stnBl基因進行選擇性失活,獲得stnBl基因失活突變菌株ΔstnBl;

C、對所述突變菌株ΔstnBl進行發酵,將發酵液離心,離心后的濾液調整pH值至9~10,用不溶于水的中等極性有機溶劑A反復萃取,保留中等極性有機溶劑相A,濃縮得到粗提物A,對所述粗提物A進行純化,即得。

9.如權利要求8所述的淡紫醌霉素甲酯的制備方法,其特征在于,步驟C中,所述不溶于水的中等極性有機溶劑A為乙酸乙酯、乙醚、氯仿或正丁醇。

10.如權利要求8所述的淡紫醌霉素甲酯的制備方法,其特征在于,步驟C中,所述不溶于水的中等極性有機溶劑A與離心后的濾液的體積比為1:3~2:1。

11.如權利要求8所述的淡紫醌霉素甲酯的制備方法,其特征在于,步驟C中,所述純化為:將粗提物A用正相硅膠柱層析,以石油醚和中等極性有機溶劑B的混合物作為流動相洗脫,經HPLC分析檢測,合并含有淡紫醌霉素甲酯的餾分并濃縮,然后用反相硅膠進行柱層析,用甲醇水溶液洗脫,將所得到的餾分經HPLC檢測后合并餾分,濃縮干燥,得淡紫醌霉素甲酯。

12.如權利要求11所述的淡紫醌霉素甲酯的制備方法,其特征在于,所述作為流動相的石油醚和中等極性有機溶劑B的體積比為1:3~10:1。

13.如權利要求11或12所述的淡紫醌霉素甲酯的制備方法,其特征在于,所述中等極性有機溶劑B為乙酸乙酯、乙醚、二氯甲烷、氯仿、丙酮或異丙醇。

14.如權利要求11所述的淡紫醌霉素甲酯的制備方法,其特征在于,所述甲醇水溶液中甲醇的體積濃度為60%~100%。

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