????技術(shù)領(lǐng)域

????本發(fā)明涉及大麥品種鑒定方法及其應(yīng)用，尤其是利用SSR引物鑒定大麥品種的方法及其應(yīng)用，屬于農(nóng)業(yè)的大麥育種與應(yīng)用技術(shù)領(lǐng)域。?

????背景技術(shù)

隨著植物育種和種子產(chǎn)業(yè)的發(fā)展，植物新品種保護(hù)（Protection?of?New?Varieties?of?Plant，簡稱PVP）作為知識(shí)產(chǎn)權(quán)的10種內(nèi)容之一，其重要性越來越突出。培育和推廣新的優(yōu)良品種是我國大麥育種發(fā)展的重要方向，因此新品種的準(zhǔn)確鑒定不僅是新品種審定和保護(hù)的前提，也為辨別假冒偽劣種子，保護(hù)自身知識(shí)產(chǎn)權(quán)，維護(hù)育種者的切身利益提供保障和科學(xué)依據(jù)。因此，開發(fā)高效、準(zhǔn)確的種子品種鑒定方法已成為種子科研單位和企業(yè)共同關(guān)注的課題。

大麥?zhǔn)侨虻谒拇蠛坦阮愖魑?適應(yīng)性強(qiáng)、用途廣，品種的差異直接影響大麥的生產(chǎn)和使用性能，因此對(duì)商用種子品種的鑒別尤為重要，同時(shí)新品種的登記測試以及資源種質(zhì)遺傳多樣性分析都需要有別于傳統(tǒng)的形態(tài)標(biāo)記田間鑒定的更加高效、準(zhǔn)確、低成本以及操作方便的分子水平品種鑒定方法。

近年來隨著分子生物學(xué)的發(fā)展，各種分子標(biāo)記技術(shù)在植物品種鑒定中得到了大量應(yīng)用。遺傳標(biāo)記經(jīng)過形態(tài)標(biāo)記、細(xì)胞學(xué)標(biāo)記、蛋白質(zhì)標(biāo)記發(fā)展到DNA標(biāo)記。DNA標(biāo)記是DNA水平上遺傳多態(tài)性的直接反映，表現(xiàn)為核苷酸序列上的差異，因此標(biāo)記在數(shù)量上幾乎是無限的。與其它遺傳標(biāo)記相比，DNA標(biāo)記還具有無表型效應(yīng)，不受環(huán)境影響等優(yōu)點(diǎn)，廣泛應(yīng)用到種質(zhì)資源研究、遺傳圖譜構(gòu)建、目的基因定位和分子標(biāo)記輔助選擇等方面，成為理想的快速進(jìn)行種子品種鑒定的檢測方法之一，其中RAPD、RFLP、AFLP、SSR及ISSR標(biāo)記等在植物品種鑒定中都有應(yīng)用。

目前我國對(duì)大麥品種進(jìn)行鑒定主要方法是按照GB/T?19557.X-2004《植物新品種特異性、一致性和穩(wěn)定性測試指南?大麥》進(jìn)行田間測定來鑒定的。這種方法存在的主要問題是運(yùn)用田間測定，鑒定結(jié)果易受環(huán)境因素的影響，也常出現(xiàn)不同測試人員對(duì)某些性狀的認(rèn)識(shí)存在偏差，導(dǎo)致代碼判定結(jié)果不一致的問題。同時(shí)田間測定周期長，不能及時(shí)、快捷地為新品種侵權(quán)案件提供鑒定依據(jù)。測試性狀多、工作量大，無法適用大量品種的測試需求。

簡單重復(fù)序列（Simple?sequence?repeat,SSR）也叫微衛(wèi)星（Microsatellites）。與其它分子標(biāo)記相比，SSR標(biāo)記具有多態(tài)信息含量高、共顯性遺傳、技術(shù)簡單、重復(fù)性好、特異性強(qiáng)等特點(diǎn)，已被廣泛應(yīng)用于植物遺傳研究和育種實(shí)踐中。目前，SSR標(biāo)記也已經(jīng)應(yīng)用于水稻、小麥、大麥、玉米等作物的分子連鎖圖譜構(gòu)建和遺傳多樣性分析。

????發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的在于：針對(duì)目前對(duì)大麥品種進(jìn)行鑒定方法只能在大田里進(jìn)行，且工作量大，等一系列問題，提供一種新的利用SSR引物鑒定大麥品種的方法及其應(yīng)用。

本發(fā)明的目的是這樣實(shí)現(xiàn)的：一種利用SSR引物鑒定大麥品種的方法，包括提取供試品種樣品的DNA、用SSR引物進(jìn)行PCR擴(kuò)增，對(duì)PCR擴(kuò)增產(chǎn)物進(jìn)行凝膠電泳，變性聚丙烯酰胺凝膠電泳及銀染，SSR譜帶分析，其特征在于：所述的供試品種樣品至少為兩個(gè)大麥品種，所述的SSR引物包括14對(duì)基本核心SSR引物和14對(duì)擴(kuò)展核心SSR引物，其中，14對(duì)基本核心SSR引物為Bmag0211?、Bmag0378、Bmag0711、Bmac0209、Bmag0877、EBmac0701、EBmac0635、Bmag0353、Scssr10148、Scssr03907、Bmag0009、Bmag0867、HVCMA和EBmac0603對(duì)應(yīng)的引物，14對(duì)擴(kuò)展核心SSR引物為Scssr02748、HVM54、Scssr07759、HvXan、HVM27、HVM60、HVM40、Bmac0181、Scssr07106、Bmag0387、Bmac0018、Scssr09398、Bmac0064和Scssr15864對(duì)應(yīng)的引物；具體步驟如下：

a)提取供試品種樣品的DNA；