技術領域

本發(fā)明涉及一種產氫菌的分離方法。

背景技術

作物秸稈是世界上農業(yè)生產的主要副產品之一，也是草食動物最豐富的飼料來源之一，同時也是一種潛在的非競爭性資源，具有數量大、分布廣、種類多的特點。全世界每年秸稈的總產量為29億多噸，僅有10%~20%作為草食家畜的飼料或其他用途，剩余的80%~90%直接還田、腐爛或被焚燒掉，這樣不僅造成了巨大的資源浪費，還造成了嚴重的環(huán)境污染。

通過瘤胃微生物的發(fā)酵，反芻動物能消化植物細細菌產生的纖維素酶大多結合在細胞膜上，所以細菌細胞需要吸附在纖維素材料上才能起作用，生產上使用很不方便，而且酶的分離提取也較困難，經濟效益不高。近二、三十年來，在纖維素酶的組成及作用機制、降解纖維素菌株的選育、纖維素酶合成的控制和調節(jié)以及纖維素酶的應用等諸多方面都取得了很大的發(fā)展。但是，由于目前已有的纖維素酶的酶解效率普遍較低，遠不及淀粉酶和蛋白酶，從而很大程度上影響了纖維素酶的大量生產和廣泛應用。因此，進一步尋找和開發(fā)高效纖維素降解菌，并不斷改善和優(yōu)化其培養(yǎng)條件，是纖維素資源能否高效利用的關鍵。

目前大多數產氫菌都是在高溫下分離，且分離出來的產氫菌不能直接利用纖維素進行產氫的問題。分離出的菌種不僅可以進行戊糖發(fā)酵且可在中溫情況下直接利用纖維素產氫節(jié)省能耗。

發(fā)明內容

本發(fā)明的目的是解決目前大多數產氫菌都是在高溫下分離，且分離出來的產氫菌不能直接利用纖維素進行產氫的問題。而提供一種纖維素戊糖中溫降解產氫菌的分離方法。

本發(fā)明的一種纖維素戊糖中溫降解產氫菌的分離方法，是通過以下步驟實現：一、取菌源進行培養(yǎng)，得懸濁液；二、取步驟一得到的懸濁液以體積百分比為1%的接種量接種于以葡萄糖為碳源的液體培養(yǎng)基中，在37℃培養(yǎng)箱中培養(yǎng)4~6d，得菌懸液A；三、以結晶纖維素為底物，在以纖維素為碳源的液體培養(yǎng)基初始pH為5.5~7.5，溫度為37℃的條件下對菌懸液A進行厭氧富集培養(yǎng)7d；四、然后取富集培養(yǎng)后的菌懸液B按體積百分比為10%的接種量接種于以纖維素為碳源的液體培養(yǎng)基中繼續(xù)在pH為5.5~7.5，溫度為37℃的條件下富集培養(yǎng)2~3d；五、重復步驟四3~5次，得菌懸液B；六、取步驟五得到的菌懸液B用無菌水按10^-1、10^-2、10^-3、10^-4和10^-5的倍數進行稀釋，將10^-5倍數稀釋后的菌懸液B按10%的接種量接種于pH為5.5~7.5的微晶纖維素固體培養(yǎng)基中，在37℃培養(yǎng)箱中培養(yǎng)至出現透明圈；七、在無菌環(huán)境下，用氮氣針挑取一個的步驟六中透明圈直徑為6~10mm的菌落至以戊糖為碳源的液體培養(yǎng)基中，在37℃培養(yǎng)箱中培養(yǎng)1~3d；八、重復步驟六至步驟七5次，即完成纖維素戊糖中溫降解產氫菌的分離；其中，步驟一中所述的菌源為牛瘤胃內含物。

本發(fā)明的有益效果：

本發(fā)明分離纖維素戊糖中溫產氫菌的方法能在中溫下分離，且分離出的產氫菌不僅能利用纖維素發(fā)酵產氫還可用于戊糖發(fā)酵產氫。

目前已知的纖維素降解菌多為高溫菌，耗能較高，不利于產業(yè)化，而中溫菌的成功分離為纖維素類廢棄物降解利用的產業(yè)化實現奠定了基礎。木糖作為木質纖維素原料水解產物中含量很豐富的一種單糖，主要是由半纖維素水解生成，含量可達植物纖維素水解糖類的35%以上，在有些原料中甚至超過了葡萄糖的含量。因此是否能夠利用木糖是利用木質纖維素的關鍵。

附圖說明

圖1為篩選所得降解木質纖維素戊糖中溫產氫菌的透射電鏡圖；

具體實施方式