[發(fā)明專利]一種纖維素戊糖中溫降解產(chǎn)氫菌的分離方法無效
| 申請?zhí)枺?/td> | 201210279104.1 | 申請日: | 2012-08-07 |
| 公開(公告)號: | CN102757927A | 公開(公告)日: | 2012-10-31 |
| 發(fā)明(設(shè)計(jì))人: | 任南琪;張璐;邢德峰 | 申請(專利權(quán))人: | 哈爾濱工業(yè)大學(xué) |
| 主分類號: | C12N1/20 | 分類號: | C12N1/20 |
| 代理公司: | 哈爾濱市松花江專利商標(biāo)事務(wù)所 23109 | 代理人: | 金永煥 |
| 地址: | 150001 黑龍*** | 國省代碼: | 黑龍江;23 |
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| 摘要: | |||
| 搜索關(guān)鍵詞: | 一種 纖維素 戊糖 降解 產(chǎn)氫菌 分離 方法 | ||
1.一種纖維素戊糖中溫降解產(chǎn)氫菌的分離方法,其特征在于纖維素戊糖中溫降解產(chǎn)氫菌的分離方法是通過以下步驟實(shí)現(xiàn):一、取菌源進(jìn)行培養(yǎng),得懸濁液;二、取步驟一得到的懸濁液以體積百分比為1%的接種量接種于以葡萄糖為碳源的液體培養(yǎng)基中,在37℃培養(yǎng)箱中培養(yǎng)4~6d,得菌懸液A;三、以結(jié)晶纖維素為底物,在以纖維素為碳源的液體培養(yǎng)基初始pH為5.5~7.5,溫度為37℃的條件下對菌懸液A進(jìn)行厭氧富集培養(yǎng)7d;四、然后取富集培養(yǎng)后的菌懸液B按體積百分比為10%的接種量接種于以纖維素為碳源的液體培養(yǎng)基中繼續(xù)在pH為5.5~7.5,溫度為37℃的條件下富集培養(yǎng)2~3d;五、重復(fù)步驟四3~5次,得菌懸液B;六、取步驟五得到的菌懸液B用無菌水按10-1、10-2、10-3、10-4和10-5的倍數(shù)進(jìn)行稀釋,將10-5倍數(shù)稀釋后的菌懸液B按10%的接種量接種于pH為5.5~7.5的微晶纖維素固體培養(yǎng)基中,在37℃培養(yǎng)箱中培養(yǎng)至出現(xiàn)透明圈;七、在無菌環(huán)境下,用氮?dú)忉樚羧∫粋€(gè)的步驟六中透明圈直徑為6~10mm的菌落至以戊糖為碳源的液體培養(yǎng)基中,在37℃培養(yǎng)箱中培養(yǎng)1~3d;八、重復(fù)步驟六至步驟七5次,即完成纖維素戊糖中溫降解產(chǎn)氫菌的分離;其中,步驟一中所述的菌源為牛瘤胃內(nèi)含物。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種纖維素戊糖中溫降解產(chǎn)氫菌的分離方法,其特征在于步驟一中所述的取菌源進(jìn)行培養(yǎng)是指:將菌源放入裝有玻璃珠的滅菌血清瓶內(nèi),在無菌狀態(tài)下加入?yún)捬鯚o菌水,再向滅菌血清瓶中通氮?dú)?min后,將滅菌血清瓶進(jìn)行密封,并放入恒溫?fù)u床中,在溫度為37℃,轉(zhuǎn)速為140r/min的條件下培養(yǎng)6~8h;其中菌源與厭氧無菌水的體積比為1:5。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種纖維素戊糖中溫降解產(chǎn)氫菌的分離方法,其特征在于步驟一和步驟三中所述的以葡萄糖為碳源的液體培養(yǎng)基按重量份數(shù)是由1份氯化銨、1份氯化鈉、3份磷酸氫二鉀、1.5份磷酸二氫鉀、0.7份半胱氨酸、0.2份硫酸鎂、0.2份氯化鉀、2份酵母提取物、0.5份維生素,0.5份微量元素,0.05份質(zhì)量百分含量為0.01%的刃天青和10份的葡萄糖組成的。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種纖維素戊糖中溫降解產(chǎn)氫菌的分離方法,其特征在于步驟五中所述的微晶纖維素固體培養(yǎng)基是由微晶纖維素和瓊脂粉組成;其中,微晶纖維素濃度為5g/L,瓊脂粉濃度為20g/L。
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種纖維素戊糖中溫降解產(chǎn)氫菌的分離方法,其特征在于步驟五中所述的微晶纖維素液體培養(yǎng)基按重量份數(shù)是由1份氯化銨、1份氯化鈉、3份磷酸氫二鉀、1.5份磷酸二氫鉀、0.7份半胱氨酸、0.2份硫酸鎂、0.2份氯化鉀、2份酵母提取物、0.5份維生素,0.5份微量元素,0.05份質(zhì)量百分含量為0.01%的刃天青和5份的微晶纖維素組成的。
6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種纖維素戊糖中溫降解產(chǎn)氫菌的分離方法,其特征在于步驟一和步驟六中所述的以戊糖為碳源的液體培養(yǎng)基按重量份數(shù)是由1份氯化銨、1份氯化鈉、3份磷酸氫二鉀、1.5份磷酸二氫鉀、0.7份半胱氨酸、0.2份硫酸鎂、0.2份氯化鉀、2份酵母提取物、0.5份維生素,0.5份微量元素,0.05份質(zhì)量百分含量為0.01%的刃天青和5份的戊糖組成的。
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