技術領域

本發明涉及化學發光免疫分析技術領域，特別涉及一種檢測AKT2蛋白的試劑盒及其制備方法，結合了生物素-親和素免疫放大技術和化學發光免疫分析技術。

背景技術

AKT2基因由417個腺嘌呤、526個胞嘧啶、520個鳥嘌呤核386個胸腺嘧啶組成。AKT2蛋白是由AKT2基因表達的蛋白，AKT2蛋白又名β-RAC-絲氨酸/蘇氨酸蛋白激酶，在科研和生產過程中，需要測定溶液中AKT2蛋白含量變化，來監控實驗條件和監控生產過程。

目前AKT2蛋白測定方法有膠體金免疫層析(GICA)；蛋白質印跡(WB)；酶聯免疫吸附試驗(ELISA)，化學發光法免疫分析(CLIA)；GICA、ELISA、WB的優點是相對成本低廉，缺點是靈敏度低，AKT2蛋白含量少的情況下檢測不出，CLIA檢測靈敏度比上述方法高，但還是不能滿足科研上對AKT2蛋白超微量檢測的需要。為了適應科研和生產上對檢測靈敏度的更高要求，需要對化學發光技術進行創新。

1977年，Halmann將具有高靈敏度的化學發光測定技術與高特異性的免疫反應結合起來，建立了化學發光免疫分析法(CLIA)。經過幾十年的發展。目前根據標記物的不同，化學發光免疫分析可分以下四個類型：(1)以辣根過氧化物酶(HRP)為標記物的酶促化學發光系統。該系統的發光底物為魯米諾及其衍生物，在氧化劑存在下，HRP催化魯米諾及其衍生物發光，波長425nm。苯酚類化合物可增強其發光強度；(2)以堿性磷酸酶為標記物的酶促化學發光系統。該系統的發光底物為1，2一二氧環乙烷衍生物(或稱金剛烷衍生物)。例如AMPPD，CSPD，CDP-Star，Lumi-phos480，Lumiphos-530等。表面活性劑會增強并延長其發光強度，發光波長470nm；(3)以吖啶酯類為標記物的化學發光系統。該系統采用直接標記吖啶酯類發光劑，吖啶酯類發光劑在堿性H₂O₂作用下直接發光，波長430nm處吖啶酯類發光系統發光強度高；(4)以三聯吡啶釕[Ru(bpy)₃]²⁺為標記物的電化學發光系統。是通過施加一定的電壓進行電化學反應，在電極表面產生電生物質，然后電生物質與體系中三丙胺(TPA)之間通過電子傳遞形成激發態，之后激發態的能量以光的形式釋放出來.在波長350～420nm處發光強度高。

1982年，Ikarlyama等以氯化血紅素代替辣根過氧化酶(HRP)，用碳二亞胺法將其標記在人體血清白蛋白(HSA)上，結合酶免疫分析技術，對HSA的化學發光免疫測試進行了初步探討。他們這一開創性的研究，為金屬卟啉在酶免疫分析中的應用奠定了基礎。

1984年，Hara等將鐵卟啉配合物標記于HSA抗體上用于檢測HSA，并將這一體系應用于分析化學中。

1992年，Adam等對鐵卟啉和錳卟啉的催化機理進行的研究，并與辣根過氧化酶的催化發光效應進行了比較。

1993年，Motsenbocker等用光敏劑和金屬卟啉標記抗體進行免疫檢測。

1994年，慈云祥等課題組對于金屬卟啉催化劑替代辣根過氧化酶催化化學發光反應也進行了一些探索。

2006年，Komagoe等卟啉誘導的光學生成過氧化氫的測定，用魯米諾發光法：在水溶液中與卟啉聚集的一個結構活性關系進行研究。

2006年，Rana等電化學產生過氧化氫和卟啉化學發光法進行了嘗試。

2006年，李春艷等四苯基卟啉鋅摻雜8-羥基喹啉鋁與四苯基聯苯二胺的電致發光性能進行了研究。

2007年，劉波等發光材料四苯基卟啉及其金屬配合物的合成及性能進行了研究。

2008年，吳俊等卟啉摻雜MEH-PPV的發光性能進行了探討。

2011年，D?Wu等新型化學發光流動注射分析減少其對魯米諾-間-四(3-甲氧基-4-羥基)苯基卟啉錳催化過氧化氫的反應進行了研究。

2012年，Kazemi等對動力學化學發光錳(Ⅲ)-四(4-磺酸)卟啉魯米諾過氧化氫體系的人和牛血清白蛋白的影響進行了研究探索。