技術領域

本發明涉及一種12-對甲基苯酰氧基-14-脫氧穿心蓮內酯光親和標記分子探針，它們的制備方法及含有它們的藥物組合物。?

技術背景

近數十年來，由于計算機科學、生命科學、化學等學科的交叉滲透，新藥研發的模式和方法也發生了巨大變化，產生了一系列新的理論、方法和技術。當今創新藥物的發現越來越依賴于靶點的發現以及靶點與活性化合物作用模式的確定，而目前基因水平上的生物技術還不能解決哪種蛋白質是針對某種疾病的小分子藥物的靶點，因此針對藥物發現研究的技術重心由基因組轉向了蛋白質組。而最近幾十年發展起來的小分子探針標記技術在藥物靶點發現過程中有著無可比擬的優勢，極大的促進了藥物研發的進程。?

光親和標記小分子探針是一種活性基于蛋白譜技術，結合現代分子生物學、細胞生物學和有機化學等多學科的優勢，用于包括靶點發現在內的蛋白質功能研究的高選擇性的分子探針。該探針主要包括四個功能部位：活性基團、光親和標記基團、連接基團和報告基團或潛在的報告基團(可以與連有疊氮基團的生物素等發生“click”反應引入報告基團)。光親和標記基團的作用是在探針分子與靶點蛋白形成復合物后經紫外光照射，光親和標記基團分解產生很活潑的反應中間體卡賓或氮賓，該中間體含有自由電子對，可以將探針分子以共價鍵結合的方式穩固地標記在靶點蛋白的活性部位，然后再利用潛在的報告基團進行分離、純化、檢測等操作。因此光親和標記技術是研究分子水平上配體與靶標間相互作用的重要方法。?

開展小分子探針標記技術研究對于已知藥理活性而靶點不明確的活性分子具有重要意義。比如新的藥物靶點的發現，或者對一個已知蛋白的功能作新的闡述，這對于從分子水平闡明疾病的發生、發展及治療的意義是不言而喻的。這些靶點可被發展為高效、快速的高通量篩選模型，并在短時間內隨機篩選大量的小分子化合物，發現一些更高活性的小分子化合物作為先導物用于進一步的新藥開發研究。這樣，從一個小分子探針為起點，其母體化合物或許在類藥性、有效性，甚至代謝穩定性等方面存在問題，但新發現的化合物則不受原有結構的限制，有更寬的改造空間。?

12-對甲基苯酰氧基-14-脫氧穿心蓮內酯是一種穿心蓮內酯衍生物，其分子結構為：?

12-對甲基苯酰氧基-14-脫氧穿心蓮內酯以穿心蓮內酯為起始原料，經縮酮保護、重排、酯化等步驟合成得到。近年來的研究表明，12-對甲基苯酰氧基-14-脫氧穿心蓮內酯具有較好的抗炎活性。如李晶等報道了12-對甲基苯酰氧基-14-脫氧穿心蓮內酯對LPS誘導的小鼠巨噬細胞分泌的兩種主要的炎癥介質TNF-α和IL-6具有較好的抑制活性，其在20μM劑量下，對這兩種炎癥介質的抑制率分別為58.4％和67.9％，強于穿心蓮內酯的37.46％和44％。另一方面，12-對甲基苯酰氧基-14-脫氧穿心蓮內酯對生理狀態下的巨噬細胞分泌炎癥介質TNF-α和IL-6具有一定的促進作用，其在20μM劑量下對TNF-α和IL-6分泌的促進率分別為52.29％和27.68％，而穿心蓮內酯則沒有表現出這種作用(Li?J，Huang?WL，Zhang?HB，et?al.Synthesis?of?andrographolide?derivatives?and?their?TNF-a?and?IL-6?expression?inhibitory?activities[J].Bioorg.Med.Chem.Lett.，2007，17，6891-6894.)。上述結果說明12-對甲基苯酰氧基-14-脫氧穿心蓮內酯對巨噬細胞的功能活化具有雙向調節作用，且至少部分是通過對巨噬細胞內的信號傳導通路調節來實現的，但其靶蛋白及其作用機制尚未完全闡明。?

巨噬細胞為一類參與炎癥和免疫反應的重要細胞，巨噬細胞上存在著多種受體和相應的信號通路，其信號過度活化或活化不足會導致機體功能異常和疾病的發生，而巨噬細胞膜和細胞內存在著其它很多信號通路的正相或負相調控，使之維持適度的活化水平。調控巨噬細胞的活化與功能對敗血癥等失控性炎癥反應，免疫缺陷和自身免疫性疾病的防治具有重要意義。因此，如Tolls樣受體及其信號通路中的一系列蛋白激酶IRAK家族、MAPK家族、泛素化酶E2及轉錄因子NF-κB、AP-1等都已成為調節巨噬細胞活化的潛在藥物靶點，探究這一復雜的調控網絡的信號關聯與調節機制，以及新的調控分子的發現也是當前該領域的前沿熱點之一。?