[發(fā)明專利]檢測(cè)IBR病毒抗體的金標(biāo)免疫滲濾試劑盒及檢測(cè)方法有效
| 申請(qǐng)?zhí)枺?/td> | 201210204875.4 | 申請(qǐng)日: | 2012-06-20 |
| 公開(kāi)(公告)號(hào): | CN102692499A | 公開(kāi)(公告)日: | 2012-09-26 |
| 發(fā)明(設(shè)計(jì))人: | 王武軍;徐淑菲;孔繁德;白泉陽(yáng);唐泰山;高麗欽;劉正才;黃一帆;鄭騰;張?bào)w銀 | 申請(qǐng)(專利權(quán))人: | 福建出入境檢驗(yàn)檢疫局檢驗(yàn)檢疫技術(shù)中心 |
| 主分類號(hào): | G01N33/569 | 分類號(hào): | G01N33/569;G01N33/531 |
| 代理公司: | 福州元?jiǎng)?chuàng)專利商標(biāo)代理有限公司 35100 | 代理人: | 蔡學(xué)俊 |
| 地址: | 350001 福建*** | 國(guó)省代碼: | 福建;35 |
| 權(quán)利要求書(shū): | 查看更多 | 說(shuō)明書(shū): | 查看更多 |
| 摘要: | |||
| 搜索關(guān)鍵詞: | 檢測(cè) ibr 病毒 抗體 免疫 滲濾 試劑盒 方法 | ||
1.一種檢測(cè)IBR病毒抗體的金標(biāo)免疫滲濾試劑盒,其特征在于,所述試劑盒的組成包括:
a.??????牛傳染性鼻氣管炎病毒抗原;
b.??????金標(biāo)記羊抗牛抗體;
c.??????洗滌液;
d.??????封閉液。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的檢測(cè)IBR病毒抗體的金標(biāo)免疫滲濾試劑盒,其特征在于,所述牛傳染性鼻氣管炎病毒抗原的制備方法如下:采用無(wú)血清培養(yǎng)方法在牛腎傳代細(xì)胞上培養(yǎng)牛傳染性鼻氣管炎病毒,將牛傳染性鼻氣管炎病毒的培養(yǎng)液反復(fù)凍融3次,5000?r/min離心30?min,取上清液裝入透析袋中,置于0.01?mol/L?pH7.4?PBS?緩沖液中透析,直至培養(yǎng)液透明清亮為止,然后將透析液濃縮。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的檢測(cè)IBR病毒抗體的金標(biāo)免疫滲濾試劑盒,其特征在于,所述封閉液為含10g/L酪蛋白、0.5mL/L吐溫-20的0.01?mol/L?pH7.2的PBS溶液或含5g/L酪蛋白、0.5mL/L?吐溫-20的0.01?mol/L?pH7.2的PBS溶液;所述洗滌液為含0.5ml/L?吐溫-20的0.01mol/L?pH7.2的PBS緩沖液。
4.一種利用權(quán)利要求1-3中任一種所述金標(biāo)免疫滲濾試劑盒檢測(cè)牛傳染性鼻氣管炎病毒抗體的方法,其特征在于:先將牛傳染性鼻氣管炎病毒抗原點(diǎn)樣于硝酸纖維素膜上,用封閉液封閉后加待測(cè)血清樣品,洗滌液洗滌,然后加金標(biāo)記羊抗牛抗體,洗滌液洗滌,觀察結(jié)果,若點(diǎn)樣處出現(xiàn)紅色斑點(diǎn)即為陽(yáng)性,若不出現(xiàn)紅色斑點(diǎn)即為陰性。
5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的利用金標(biāo)免疫滲濾試劑盒檢測(cè)牛傳染性鼻氣管炎病毒抗體的方法,其特征在于:在試劑盒內(nèi)硝酸纖維素膜上對(duì)稱位置點(diǎn)樣如下:一點(diǎn)為牛傳染性鼻氣管炎病毒抗原1μL作為檢測(cè)點(diǎn),另一點(diǎn)為葡萄球菌A蛋白1μL作為質(zhì)控點(diǎn);室溫干燥后加入100μL封閉液;待封閉液干燥后,加入待檢血清50μL?-100μL;滲入后加入洗滌液洗滌;加金標(biāo)記羊抗牛抗體100μL;滲入后加入洗滌液洗滌,洗去未結(jié)合的金標(biāo)記羊抗牛抗體;5?min-10min?內(nèi)若在硝酸纖維素膜上點(diǎn)樣處出現(xiàn)紅色斑點(diǎn)即為陽(yáng)性,若不出現(xiàn)紅色斑點(diǎn)即為陰性,作為試驗(yàn)有效的標(biāo)志,質(zhì)控點(diǎn)應(yīng)出現(xiàn)紅色斑點(diǎn),否則該膜無(wú)效,應(yīng)重新點(diǎn)制膜。
6.根據(jù)權(quán)利要求4所述的一種利用金標(biāo)免疫滲濾試劑盒檢測(cè)牛傳染性鼻氣管炎病毒抗體的方法,其特征在于,所述金標(biāo)記羊抗牛抗體采用檸檬酸三鈉還原法制備納米膠體金溶液,然后在納米膠體金溶液中加入羊抗牛抗體;其中所采用的重懸緩沖液為含10g/L牛血清白蛋白、0.5g/L聚乙二醇20?000、0.5mL/L?吐溫-20、0.01mol/L?PH7.2的PBS緩沖液;所采用的膠體金稀釋液為含10g/L?牛血清白蛋白、0.5g/L?聚乙二醇20?000、50g/L蔗糖、0.5mL/L?吐溫-20、0.01mol/L?PH7.2的PBS緩沖液。
7.根據(jù)權(quán)利要求5所述的一種利用金標(biāo)免疫滲濾試劑盒檢測(cè)牛傳染性鼻氣管炎病毒抗體的方法,其特征在于,所述點(diǎn)樣時(shí)牛傳染性鼻氣管炎病毒抗原濃度為0.95?mg/mL-1.81mg/mL,葡萄球菌A蛋白濃度為1?g/?L。
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