[發明專利]一種從釀酒酵母細胞中高效提取高分子量基因組的方法無效
| 申請號： | 201210003952.X | 申請日： | 2012-01-09 |
| 公開（公告）號： | CN103194440A | 公開（公告）日： | 2013-07-10 |
| 發明（設計）人： | 張震宇;顧春銀;徐燦;李忠浩;楊冬美 | 申請（專利權）人： | 江南大學 |
| 主分類號： | C12N15/10 | 分類號： | C12N15/10;C12R1/865 |
| 代理公司： | 暫無信息 | 代理人： | 暫無信息 |
| 地址： | 214122 江蘇*** | 國省代碼： | 江蘇;32 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 一種 釀酒 酵母 細胞 高效 提取 分子量 基因組 方法 | ||
【權利要求書】：
1.一種從釀酒酵母細胞中高效提取高分子量基因組的方法，其特征在于：包括破壁、去除組蛋白和RNA、抽提、沉淀、溶解，具體工藝過程如下：
破壁：用500μl的山梨醇緩沖液懸浮釀酒酵母，加入40μl、1000U/ml的lyticase和1μl?β-巰基乙醇，混勻后37℃孵育3h。
去除組蛋白和RNA：8000r/min?1min離心棄上清(加速要慢)，加500μlTE緩沖液(pH8.0)，混勻后加50μl、10％SDS，加入10μl、200mg/ml蛋白酶k，再加入10μl、10g/ml?RNase，37℃孵育1h。
抽提：加入500μl平衡酚，顛倒混勻、靜置5min，8000r/min離心1min。移取上層加入250μl平衡酚和250μl氯仿∶異戊醇(24∶1)顛倒混勻、靜置5min，加500μl氯仿，顛倒混勻、靜置5min，8000r/min離心1min，取上層水相。
沉淀：加入2倍體積無水乙醇，-20℃放置1h。12000r/min離心10min。
溶解：棄上清并置于超凈臺吹干，加入50μl?ddH2O溶解DNA。
所述山梨醇緩沖液為：1mol/L，pH?7.5；
所述TE緩沖液為：1mol/LTris·Cl，pH?8.0，0.5mol/L?EDTA，0.5mol/L檸檬酸，加水至1000ml。
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