技術領域

本發明涉及一種肺炎鏈球菌表面蛋白A的部分序列替換的去除人同源性的肺炎鏈球菌表面蛋白A，表達，純化方法及用途。

背景描述

肺炎球菌(Streptococcus?pneumoniae)，又稱肺炎鏈球菌，是有莢膜的革蘭氏陽性雙球菌。多糖莢膜是主要的毒力因子，根據莢膜的組成差異，已鑒定出約90個不同的肺炎球菌血清型。肺炎球菌可引起肺炎、腦膜炎、敗血癥、中耳炎等疾病，在2歲以下嬰幼兒和老年人中發病率最高，已成為世界范圍內引起死亡的重要原因之一。據WHO?2005年估計，全球每年有160萬人死于各類肺炎球菌疾病，其中包括70-100萬5歲以下的兒童，多數死亡病例發生在發展中國家。在我國，肺炎也是導致嬰幼兒死亡的頭號殺手之一。HIV感染以及與免疫缺陷相關的其他疾病大大增加了感染肺炎球菌疾病的可能性。日益增加的肺炎球菌耐藥性問題也使開發疫苗以控制肺炎球菌性疾病變得更為迫切。當前，甲型H1N1流感在全球肆虐，由其引發的呼吸道并發感染肺炎往往導致極大的死亡率，各國政府在大力投入開發該流感疫苗的同時倡導接種肺炎球菌疫苗。為了降低肺炎球菌感染與攜帶率，保障人民健康，預防與遏制疾病蔓延，接種肺炎球菌疫苗非常必要。WHO在2007年建議發展中國家將肺炎球菌結合疫苗納入國家免疫計劃。

目前市場上供應的肺炎球菌疫苗產品主要為多糖疫苗和結合疫苗。其中23價肺炎球菌莢膜多糖疫苗的抗原為胸腺非依賴型，對嬰幼兒及老年人的免疫效果弱，主要用于有肺炎球菌性疾病高風險的大齡兒童和成年人，不能用于2歲以下的兒童。蛋白多糖結合疫苗如7價肺炎結合疫苗(PCV-7)，在各年齡組的免疫原性都很強，但目前只批準用于5歲以下兒童，且其只覆蓋的7個血清型，僅占亞洲地區致病血清型的55％，使得應用過程中可能出現血清型的替換。目前PCV-7的國內市場價860元/劑，2歲以下幼兒需接種3-4次，價格較高。國內外肺炎疫苗市場巨大，開發新型高效且低成本的疫苗勢在必行，國內外正在加緊研制重組蛋白疫苗及DNA新型疫苗。重組蛋白疫苗的開發主要集中在PspA、PsaA和溶血素等重要候選蛋白上，其中PspA是最具有潛力且研究最多的候選蛋白之一。

PspA，肺炎球菌表面蛋白A，廣泛存在于90種肺炎球菌血清型中，不同血清型的肺炎球菌PspA蛋白分子質量不同，介于60～100Ka。PspA分子可分為兩大家族，五個亞群(clade)。PspA主要由五個域組成：從N端到C端依次分為信號肽、超螺旋區、組氨酸富集區、膽堿結合區和C端尾巴。超螺旋區是一個重要的抗原決定區域。單克隆抗體識別的位點在N端，該區具有高度可變性。在不同血清型中，PspA的C端疏水區具有保守結構。PspA主要作用是與乳鐵蛋白結合使之喪失功能并抑制補體活化，降低C3b在肺炎球菌表面的沉淀從而干擾補體介導的吞噬調理作用。該蛋白具有高效的免疫原性，在小鼠中研究證明，PspA蛋白可以激發對肺炎球菌感染的保護性免疫反應。

Sanofi?Pasteur(賽諾菲-巴斯德)和University?of?Alabama?at?Birmingham(UAB)合作研發PspA疫苗，并完成了兩個疫苗產品的臨床一期實驗，結果證明有非常好的保護作用。但在采用PspA(RX-1亞型)作為保護性抗原進行試驗時，同時也在部分試驗者身上觀察到抗人體心肌肌球蛋白的抗體短暫升高。抗心肌蛋白抗體在人體中正常存在，目前尚且缺乏顯示抗心肌肌球蛋白抗體可導致疾病的臨床證據，但是仍存在安全隱患，對PspA疫苗的應用推廣帶來巨大障礙，降低PspA和心肌蛋白交叉反應非常必要。

發明內容

本發明的目的是克服野生型肺炎表面蛋白A作為抗原的不足，提供一種去除人同源性的肺炎鏈球菌表面蛋白A。

本發明的第二個目的是提供一種表達去除人同源性的肺炎鏈球菌表面蛋白A的用途。

本發明的第三個目的是提供一種表達去除人同源性的肺炎鏈球菌表面蛋白A的基因。

本發明的第四個目的是提供一種含有表達人同源性的肺炎鏈球菌表面蛋白A基因重組載體。

本發明的第五個目的是提供一種含有人同源性的肺炎鏈球菌表面蛋白A基因重組載體的菌株。

本發明的第六個目的是提供一種去除人同源性的肺炎鏈球菌表面蛋白A的純化方法。

本發明的技術方案概述如下：

去除人同源性的肺炎鏈球菌表面蛋白A，是序列表SEQ?ID?No.1所示的氨基酸序列或是序列表SEQ?ID?No.2所示的氨基酸序列。

上述去除人同源性的肺炎鏈球菌表面蛋白A在制備預防肺炎鏈球菌感染的疫苗中的應用。