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[發(fā)明專利]分泌生產(chǎn)谷胱甘肽的重組菌株及其制備方法有效

專利信息
申請?zhí)枺?/td> 201110344782.7 申請日: 2011-11-03
公開(公告)號(hào): CN103087932A 公開(公告)日: 2013-05-08
發(fā)明(設(shè)計(jì))人: 許善峰 申請(專利權(quán))人: 鎮(zhèn)江市德爾生物制品研究所有限公司
主分類號(hào): C12N1/19 分類號(hào): C12N1/19;C12N15/09;C12P21/02;C12R1/84
代理公司: 北京路浩知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理有限公司 11002 代理人: 王朋飛;王加嶺
地址: 212009 江蘇省鎮(zhèn)*** 國省代碼: 江蘇;32
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摘要:
搜索關(guān)鍵詞: 分泌 生產(chǎn) 谷胱甘肽 重組 菌株 及其 制備 方法
【權(quán)利要求書】:

1.一種分泌產(chǎn)谷胱甘肽重組菌株,其特征在于,其谷胱甘肽胞外向胞內(nèi)運(yùn)輸?shù)鞍谆蚴Щ睿⑶冶磉_(dá)外源谷胱甘肽胞內(nèi)向胞外運(yùn)輸?shù)鞍谆颉?/p>

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的重組菌株,其特征在于,所述的谷胱甘肽胞外向胞內(nèi)運(yùn)輸?shù)鞍谆驗(yàn)镠gt1基因。

3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的重組菌株,其特征在于,所述的外源谷胱甘肽胞內(nèi)向胞外運(yùn)輸?shù)鞍谆驗(yàn)楦叩壬锕入赘孰陌麅?nèi)向胞外運(yùn)輸?shù)鞍谆蚧蚱渫蛔凅w。

4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的重組菌株,其特征在于,所述的外源谷胱甘肽胞內(nèi)向胞外運(yùn)輸?shù)鞍谆驗(yàn)槿薓RP2突變體,其核苷酸序列如SEQ?ID?No.23所示。

5.根據(jù)權(quán)利要求1~4所述的重組菌株,其特征在于,其谷胱甘肽合成轉(zhuǎn)錄調(diào)控失調(diào),并且其半胱氨酸向高半胱氨酸循環(huán)途徑上的基因被失活或敲除。

6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的重組菌株,其特征在于,采用組成型或誘導(dǎo)型啟動(dòng)子表達(dá)谷胱甘肽相關(guān)合成酶基因gsh1和gsh2基因或表達(dá)谷胱甘肽雙功能合成酶gshF基因,使谷胱甘肽合成轉(zhuǎn)錄調(diào)控失調(diào)。

7.根據(jù)權(quán)利要求5所述的重組菌株,其特征在于,內(nèi)源的半胱氨酸向高半胱氨酸循環(huán)途徑上的基因Str3被失活或敲除。

8.根據(jù)權(quán)利要求6或7所述的重組菌株,其為真菌,優(yōu)選酵母菌,最優(yōu)選畢赤酵母。

9.制備權(quán)利要求1~8任一項(xiàng)所述的重組菌株的方法,其包括如下步驟:

1)將大腸桿菌gsh1和gsh2的表達(dá)盒轉(zhuǎn)化到畢赤酵母中,獲得表達(dá)大腸桿菌gsh1和gsh2基因的畢赤酵母。

2)將步驟1)獲得的畢赤酵母通過同源重組-反篩選基因修飾技術(shù)失活內(nèi)源的Str3基因,從而獲得表達(dá)谷胱甘肽合成失調(diào),半胱氨酸向高半胱氨酸的循環(huán)途徑被切斷的畢赤酵母。

3)將人MRP2突變體的表達(dá)盒轉(zhuǎn)化到步驟2)獲得的畢赤酵母,并通過同源重組-反篩選基因修飾技術(shù)失活內(nèi)源的Hgt1基因,從而獲得表達(dá)谷胱甘肽合成失調(diào),半胱氨酸向高半胱氨酸的循環(huán)途徑被切斷,以及谷胱甘肽運(yùn)輸通路被改變的畢赤酵母新菌株。

10.權(quán)利要求1~8任一項(xiàng)所述的重組菌株在發(fā)酵生產(chǎn)谷胱甘肽中的應(yīng)用。

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1、專利原文基于中國國家知識(shí)產(chǎn)權(quán)局專利說明書;

2、支持發(fā)明專利 、實(shí)用新型專利、外觀設(shè)計(jì)專利(升級中);

3、專利數(shù)據(jù)每周兩次同步更新,支持Adobe PDF格式;

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