[發(fā)明專利]分泌生產(chǎn)谷胱甘肽的重組菌株及其制備方法有效
| 申請?zhí)枺?/td> | 201110344782.7 | 申請日: | 2011-11-03 |
| 公開(公告)號(hào): | CN103087932A | 公開(公告)日: | 2013-05-08 |
| 發(fā)明(設(shè)計(jì))人: | 許善峰 | 申請(專利權(quán))人: | 鎮(zhèn)江市德爾生物制品研究所有限公司 |
| 主分類號(hào): | C12N1/19 | 分類號(hào): | C12N1/19;C12N15/09;C12P21/02;C12R1/84 |
| 代理公司: | 北京路浩知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理有限公司 11002 | 代理人: | 王朋飛;王加嶺 |
| 地址: | 212009 江蘇省鎮(zhèn)*** | 國省代碼: | 江蘇;32 |
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| 摘要: | |||
| 搜索關(guān)鍵詞: | 分泌 生產(chǎn) 谷胱甘肽 重組 菌株 及其 制備 方法 | ||
1.一種分泌產(chǎn)谷胱甘肽重組菌株,其特征在于,其谷胱甘肽胞外向胞內(nèi)運(yùn)輸?shù)鞍谆蚴Щ睿⑶冶磉_(dá)外源谷胱甘肽胞內(nèi)向胞外運(yùn)輸?shù)鞍谆颉?/p>
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的重組菌株,其特征在于,所述的谷胱甘肽胞外向胞內(nèi)運(yùn)輸?shù)鞍谆驗(yàn)镠gt1基因。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的重組菌株,其特征在于,所述的外源谷胱甘肽胞內(nèi)向胞外運(yùn)輸?shù)鞍谆驗(yàn)楦叩壬锕入赘孰陌麅?nèi)向胞外運(yùn)輸?shù)鞍谆蚧蚱渫蛔凅w。
4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的重組菌株,其特征在于,所述的外源谷胱甘肽胞內(nèi)向胞外運(yùn)輸?shù)鞍谆驗(yàn)槿薓RP2突變體,其核苷酸序列如SEQ?ID?No.23所示。
5.根據(jù)權(quán)利要求1~4所述的重組菌株,其特征在于,其谷胱甘肽合成轉(zhuǎn)錄調(diào)控失調(diào),并且其半胱氨酸向高半胱氨酸循環(huán)途徑上的基因被失活或敲除。
6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的重組菌株,其特征在于,采用組成型或誘導(dǎo)型啟動(dòng)子表達(dá)谷胱甘肽相關(guān)合成酶基因gsh1和gsh2基因或表達(dá)谷胱甘肽雙功能合成酶gshF基因,使谷胱甘肽合成轉(zhuǎn)錄調(diào)控失調(diào)。
7.根據(jù)權(quán)利要求5所述的重組菌株,其特征在于,內(nèi)源的半胱氨酸向高半胱氨酸循環(huán)途徑上的基因Str3被失活或敲除。
8.根據(jù)權(quán)利要求6或7所述的重組菌株,其為真菌,優(yōu)選酵母菌,最優(yōu)選畢赤酵母。
9.制備權(quán)利要求1~8任一項(xiàng)所述的重組菌株的方法,其包括如下步驟:
1)將大腸桿菌gsh1和gsh2的表達(dá)盒轉(zhuǎn)化到畢赤酵母中,獲得表達(dá)大腸桿菌gsh1和gsh2基因的畢赤酵母。
2)將步驟1)獲得的畢赤酵母通過同源重組-反篩選基因修飾技術(shù)失活內(nèi)源的Str3基因,從而獲得表達(dá)谷胱甘肽合成失調(diào),半胱氨酸向高半胱氨酸的循環(huán)途徑被切斷的畢赤酵母。
3)將人MRP2突變體的表達(dá)盒轉(zhuǎn)化到步驟2)獲得的畢赤酵母,并通過同源重組-反篩選基因修飾技術(shù)失活內(nèi)源的Hgt1基因,從而獲得表達(dá)谷胱甘肽合成失調(diào),半胱氨酸向高半胱氨酸的循環(huán)途徑被切斷,以及谷胱甘肽運(yùn)輸通路被改變的畢赤酵母新菌株。
10.權(quán)利要求1~8任一項(xiàng)所述的重組菌株在發(fā)酵生產(chǎn)谷胱甘肽中的應(yīng)用。
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