[發明專利]一種利用單克隆抗體技術制備堿性磷酸酶的方法無效
| 申請號: | 201110326360.7 | 申請日: | 2011-10-25 |
| 公開(公告)號: | CN102363771A | 公開(公告)日: | 2012-02-29 |
| 發明(設計)人: | 王艷鴿;馮書營;盛俊民;丁勇;董爍 | 申請(專利權)人: | 河南大學 |
| 主分類號: | C12N9/16 | 分類號: | C12N9/16;C07K16/40 |
| 代理公司: | 鄭州聯科專利事務所(普通合伙) 41104 | 代理人: | 時立新 |
| 地址: | 475001*** | 國省代碼: | 河南;41 |
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| 摘要: | |||
| 搜索關鍵詞: | 一種 利用 單克隆抗體 技術 制備 堿性磷酸酶 方法 | ||
1.一種利用單克隆抗體技術制備堿性磷酸酶的方法,其特征在于通過以下步驟制備:(一)制備腹水:用堿性磷酸酶免疫Balb/c小鼠,再用免疫鼠的脾細胞與SP2/0骨髓瘤細胞融合,經篩選克隆獲得分泌抗堿性磷酸酶單克隆抗體的雜交瘤細胞,體內接種雜交瘤細胞,制備腹水;(二)制備堿性磷酸酶免疫親和層析柱;(三)純化抗堿性磷酸酶單克隆抗體:將步驟(一)得到的腹水加入堿性磷酸酶免疫親和層析柱,PBS洗凈柱子,甘氨酸洗脫液洗脫結合蛋白,加Tris緩沖液調整pH值,透析,收集純化的抗堿性磷酸酶單克隆抗體;(四)制備抗堿性磷酸酶單克隆抗體的免疫親和層析柱;(五)提純堿性磷酸酶:?將用于提取堿性磷酸酶的動物組織粉碎,勻漿,離心取上清液,依次經澄清過濾器、混合纖維素濾膜過濾,所得濾液經抗堿性磷酸酶單克隆抗體免疫親和層析柱,依次用PBS、生理鹽水、硫氰酸鉀洗脫液洗脫柱子并分步收集。
2.如權利要求1所述的利用單克隆抗體技術制備堿性磷酸酶的方法,其特征在于:所述Balb/c小鼠為8~10周齡雌性小鼠。
3.如權利要求1所述的利用單克隆抗體技術制備堿性磷酸酶的方法,其特征在于:步驟(一)中免疫Balb/c小鼠時,初次免疫時,堿性磷酸酶標準品50μg,加無菌水定容至0.1ml,再加入0.1ml福氏完全佐劑,乳化后腹腔注射小鼠,2周后第二次免疫,堿性磷酸酶標準品50μg,加無菌水定容至0.1ml,再加入0.1ml福氏不完全佐劑,乳化后腹腔注射小鼠,3周后第三次免疫,堿性磷酸酶標準品50μg,加無菌水定容至0.1ml,腹腔內注射小鼠,?2~3周內第四次免疫,注射堿性磷酸酶標準品150μg。
4.如權利要求1或2或3所述的利用單克隆抗體技術制備堿性磷酸酶的方法,其特征在于:步驟(五)中用于提取堿性磷酸酶的動物組織為小牛腸。
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