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[發明專利]多參照內標法定量基因表達量的方法無效

專利信息
申請號: 201110316621.7 申請日: 2011-10-18
公開(公告)號: CN102352414A 公開(公告)日: 2012-02-15
發明(設計)人: 吳沿友;黃華坤;李海濤 申請(專利權)人: 中國科學院地球化學研究所
主分類號: C12Q1/68 分類號: C12Q1/68
代理公司: 貴陽中新專利商標事務所 52100 代理人: 吳無懼
地址: 550002*** 國省代碼: 貴州;52
權利要求書: 查看更多 說明書: 查看更多
摘要:
搜索關鍵詞: 參照 法定 基因 表達 方法
【權利要求書】:

1.一種多參照內標法定量基因表達量的方法,其特征在于:它包括以下步驟:(1)將總RNA設置成一系列的倍數,并分別為模板,逆轉錄成為相應的互補DNA,再以這些互補DNA為模板,以看家基因設計出的引物為引物,以常規的統一反應體系進行PCR擴增,形成多個參照內標擴增產物;同時,將以稀釋到一定倍數的RNA為模板,逆轉錄成為相應的互補DNA,再以此互補DNA為模板,分別以被考察的基因設計出的引物和看家基因設計出的引物為引物,以上述常規的統一反應體系進行PCR擴增,形成目標基因擴增產物和看家基因擴增產物;(2)將目標基因擴增產物和看家基因擴增產物以及多個參照內標擴增產物同時電泳,獲得凝膠圖像;(3)將凝膠圖像處理成灰度圖像,經過亮度和對比度的調整,獲得表征圖像;(4)將表征圖像上的多個參照內標擴增產物的DNA圖譜的像素點與總RNA的倍數擬合成方程:????????????????????????????????????????????????,這里的X為一個參照內標擴增產物的DNA圖譜區的像素點值,Y為對應的看家基因的倍數,a,?b分別為方程的常數;(5)將表征圖像上的目標基因擴增產物和看家基因擴增產物的DNA圖譜的像素點分別帶入方程,分別計算出目標基因擴增份額Y目標和看家基因擴增份額Y看家;(6)目標基因擴增份額Y目標和看家基因擴增份額Y看家的比值,即為目的基因的相對表達量GE目標

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