技術領域

本發明屬生物技術領域，涉及篩查多發畸形綜合征的探針，尤其涉及用于篩查多發畸形綜合征的多重連續探針擴增的組合探針。該探針可用于多發畸形綜合征初步篩查。

背景技術

先天畸形(congenital?malformation，CA)是指出生時即存在的形態或結構上的異常；包括單發畸形(如唇裂、多指等)和多發畸形(multiple?congenital?malformation，MCA)。研究發現，有多種多發畸形是在某一原因作用下特異地組合而產生，成為畸形綜合征。目前，醫學上已經識別診斷的畸形綜合征已達250余種；但由于多發畸形綜合癥表型存在明顯的特異性和不均衡性，僅依靠臨床達到準確診斷較為困難。

隨著對于MCA遺傳學病因的分子遺傳學檢測技術不斷發展；70年代，染色體G帶技術發現了顯微鏡下可見的染色體異常如缺失、重復、易位和倒置，但是傳統光學顯微鏡對于染色體結構異常的最大分辨率在5-10Mb，高分辨率顯帶技術也就在3-5Mb，故而其診斷率仍小于5％。

目前，醫學上通常采用檢測基因組拷貝數變異的方法診斷上述綜合征；該方法存在以下缺陷：核型分析僅可以檢測到大于5Mb的重復/缺失；定量PCR，通量低，不適于多位點的篩查檢測；Array平臺的芯片檢測，成本明顯高于MLPA，不適用于大樣本量的篩查。

2004年兩個研究小組在Nature和Science幾乎同時發表論文，報道了人體內拷貝數變異(Copy?number?variations，CNVs)現象的存在，并因其在整個基因組中覆蓋的核苷酸總數遠遠超過SNP的總數，受到廣泛重視。所述CNVs廣泛的存在人類基因組，拷貝數的變化將影響一個較寬區域的基因組序列和很多可能基因的變化，故而CNVs在研究人類遺傳性疾病方面的巨大潛力。目前，有研究正在深入探討人類基因組CNVs變異情況與疾病的關系，大量研究表明，精神性疾病、神經性疾病、先天性疾病等存在CNV的異常。所述的CNVs主要指介于1kb和3Mb的DNA片段多態性，處于顯微鏡和高分辨率觀測范圍之間，屬于亞微觀范疇，目前檢測的技術方法較多，如熒光定量PCR、MLPA及以微陣列平臺為基礎的全基因組分析技術，其診斷率達到15％。

有關用于篩查多發畸形綜合征的多重連續探針擴增的探針的研制已引起本領域研究人員的關注。

發明內容

本發明的目的是提供篩查多發畸形綜合征的探針，尤其涉及用于篩查多發畸形綜合征的多重連續探針擴增的組合探針。

本發明所述的探針能對發病率相對較高、病因為染色體結構重復或缺失、臨床變現為多發畸形的13個常見多發畸形綜合征進行早期篩查。所述的多發畸形綜合征包括，1p36缺失綜合征、Sotos綜合征、18三體綜合征、CHARGE綜合征、Williams?Beuren綜合征、22q11缺失/重復綜合征、21三體綜合征、Smith?Magenis綜合征、13三體綜合征、Cri?du?Chat綜合征、Prader?Willi綜合征、Wolf?Hirschhorn綜合征和17q21.31缺失綜合征。

具體而言，本發明的用于篩查多發畸形綜合征的多重連續探針擴增的組合探針，其特征在于，其包括：1p36缺失綜合征、Sotos綜合征、18三體綜合征、CHARGE綜合征、Williams?Beuren綜合征、22q11缺失/重復綜合征、21三體綜合征、Smith?Magenis綜合征、13三體綜合征、Cri?du?Chat綜合征、Prader?Willi綜合征、Wolf?Hirschhorn綜合征和17q21.31缺失綜合征的關鍵基因或關鍵區域內的基因、或重復/缺失片段內兩端的基因，以及滿足相應條件的探針序列和引物序列，和磷酸化標記。

本發明的組合探針可用于上述13個常見的發病率較高的多發畸形綜合征的早期篩查。

本發明中，所述的基因為病率相對較高、病因為染色體結構重復或缺失、臨床變現為多發畸形的綜合征及選擇的目的基因，為：

(1)1p36缺失綜合征：GABRD、SKI、TP73；

(2)Sotos綜合征：NSD1；

(3)18三體綜合征：MC2R、DTNA、TCF4；

(4)CHARGE綜合征：CHD7；

(5)Williams?Beuren綜合征：CLIP2、ELN、LIMK1；

(6)22q11缺失/重復綜合征：SNAP29、TBX1、ZNF74；

(7)21三體綜合征：KCNJ6、DYRK1A、RCAN1；