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[發明專利]一種酵母展示型脂肪酶協同超聲波破碎紫菜細胞的方法無效

專利信息
申請號: 201110260328.3 申請日: 2011-09-05
公開(公告)號: CN102321596A 公開(公告)日: 2012-01-18
發明(設計)人: 阮暉;張延;余璐;徐娟;周陳偉;杜姍姍;楊璐;何國慶 申請(專利權)人: 浙江大學
主分類號: C12N9/20 分類號: C12N9/20;C12N9/60;C12N15/81;C07K1/14;C08B37/00;C12P21/06;C12R1/84
代理公司: 杭州天勤知識產權代理有限公司 33224 代理人: 胡紅娟
地址: 310027 浙*** 國省代碼: 浙江;33
權利要求書: 查看更多 說明書: 查看更多
摘要:
搜索關鍵詞: 一種 酵母 展示 脂肪酶 協同 超聲波 破碎 紫菜 細胞 方法
【權利要求書】:

1.一種酵母展示型脂肪酶協同超聲波破碎紫菜細胞的方法,包括:

將紫菜干粉、酵母展示型脂肪酶加入水中混勻,于35~37℃下酶解反應30~45min,再于30~32℃下利用功率為730~750W的超聲波破碎65~70min;

所述酵母展示型脂肪酶通過如下方法制備:

將經線性化處理的重組質粒轉入畢赤酵母(Pichia?pastoris)GS115中,將所得轉化子接種于BMMY培養基中,誘導培養72~144h后離心收集菌體,菌體經沖洗和冷凍干燥制得酵母展示型脂肪酶;

所述重組質粒由原始載體pPIC9K和依次插入原始載體pPIC9K中MFα1信號肽基因下游的脂肪酶基因和畢赤酵母GS115的細胞壁α凝集素基因組成。

2.根據權利要求1所述的方法,其特征在于,以重量份計,水1000份、紫菜干粉20~25份、酵母展示型脂肪酶1~2份。

3.一種提取紫菜多糖或紫菜蛋白的方法,包括:

將紫菜干粉、權利要求1所述的酵母展示型脂肪酶加入水中混勻,于35~37℃下酶解反應30~45min,再于30~32℃下利用功率為730~750W的超聲波破碎65~70min,得細胞破碎液,分離純化得紫菜多糖或紫菜蛋白。

4.根據權利要求3所述的方法,其特征在于,所述紫菜多糖或紫菜蛋白的分離純化方法為:將所述細胞破碎液離心后取上清液,鹽析,4℃靜置12h后離心,上清液為紫菜多糖溶液,沉淀為紫菜蛋白。

5.一種制備紫菜降血壓肽的方法,包括:

將紫菜干粉、權利要求1所述的酵母展示型脂肪酶加入水中混勻,于35~37℃下酶解反應30~45min,于30~32℃下利用功率為730~750W的超聲波破碎65~70min,分離純化得紫菜蛋白;將紫菜蛋白、酵母展示型蛋白酶加入水中混勻,于36~37℃下酶解反應130~133min,得紫菜降血壓肽;

所述的酵母展示型蛋白酶通過如下方法制備:

將經線性化處理的重組質粒轉入畢赤酵母(Pichia?pastoris)GS115中,將所得轉化子接種于BMMY培養基中,誘導培養72~144h后離心收集菌體,菌體經沖洗和冷凍干燥制得酵母展示型蛋白酶;

所述重組質粒由原始載體pPIC9K和依次插入原始載體pPIC9K中MFα1信號肽基因下游的蛋白酶基因和畢赤酵母GS115的細胞壁α凝集素基因組成。

6.根據權利要求5所述的方法,其特征在于,以重量份計,水1000份、紫菜蛋白20~22份、酵母展示型蛋白酶1~1.1份。

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