[發明專利]一種酵母展示型脂肪酶協同超聲波破碎紫菜細胞的方法無效
| 申請號: | 201110260328.3 | 申請日: | 2011-09-05 |
| 公開(公告)號: | CN102321596A | 公開(公告)日: | 2012-01-18 |
| 發明(設計)人: | 阮暉;張延;余璐;徐娟;周陳偉;杜姍姍;楊璐;何國慶 | 申請(專利權)人: | 浙江大學 |
| 主分類號: | C12N9/20 | 分類號: | C12N9/20;C12N9/60;C12N15/81;C07K1/14;C08B37/00;C12P21/06;C12R1/84 |
| 代理公司: | 杭州天勤知識產權代理有限公司 33224 | 代理人: | 胡紅娟 |
| 地址: | 310027 浙*** | 國省代碼: | 浙江;33 |
| 權利要求書: | 查看更多 | 說明書: | 查看更多 |
| 摘要: | |||
| 搜索關鍵詞: | 一種 酵母 展示 脂肪酶 協同 超聲波 破碎 紫菜 細胞 方法 | ||
1.一種酵母展示型脂肪酶協同超聲波破碎紫菜細胞的方法,包括:
將紫菜干粉、酵母展示型脂肪酶加入水中混勻,于35~37℃下酶解反應30~45min,再于30~32℃下利用功率為730~750W的超聲波破碎65~70min;
所述酵母展示型脂肪酶通過如下方法制備:
將經線性化處理的重組質粒轉入畢赤酵母(Pichia?pastoris)GS115中,將所得轉化子接種于BMMY培養基中,誘導培養72~144h后離心收集菌體,菌體經沖洗和冷凍干燥制得酵母展示型脂肪酶;
所述重組質粒由原始載體pPIC9K和依次插入原始載體pPIC9K中MFα1信號肽基因下游的脂肪酶基因和畢赤酵母GS115的細胞壁α凝集素基因組成。
2.根據權利要求1所述的方法,其特征在于,以重量份計,水1000份、紫菜干粉20~25份、酵母展示型脂肪酶1~2份。
3.一種提取紫菜多糖或紫菜蛋白的方法,包括:
將紫菜干粉、權利要求1所述的酵母展示型脂肪酶加入水中混勻,于35~37℃下酶解反應30~45min,再于30~32℃下利用功率為730~750W的超聲波破碎65~70min,得細胞破碎液,分離純化得紫菜多糖或紫菜蛋白。
4.根據權利要求3所述的方法,其特征在于,所述紫菜多糖或紫菜蛋白的分離純化方法為:將所述細胞破碎液離心后取上清液,鹽析,4℃靜置12h后離心,上清液為紫菜多糖溶液,沉淀為紫菜蛋白。
5.一種制備紫菜降血壓肽的方法,包括:
將紫菜干粉、權利要求1所述的酵母展示型脂肪酶加入水中混勻,于35~37℃下酶解反應30~45min,于30~32℃下利用功率為730~750W的超聲波破碎65~70min,分離純化得紫菜蛋白;將紫菜蛋白、酵母展示型蛋白酶加入水中混勻,于36~37℃下酶解反應130~133min,得紫菜降血壓肽;
所述的酵母展示型蛋白酶通過如下方法制備:
將經線性化處理的重組質粒轉入畢赤酵母(Pichia?pastoris)GS115中,將所得轉化子接種于BMMY培養基中,誘導培養72~144h后離心收集菌體,菌體經沖洗和冷凍干燥制得酵母展示型蛋白酶;
所述重組質粒由原始載體pPIC9K和依次插入原始載體pPIC9K中MFα1信號肽基因下游的蛋白酶基因和畢赤酵母GS115的細胞壁α凝集素基因組成。
6.根據權利要求5所述的方法,其特征在于,以重量份計,水1000份、紫菜蛋白20~22份、酵母展示型蛋白酶1~1.1份。
該專利技術資料僅供研究查看技術是否侵權等信息,商用須獲得專利權人授權。該專利全部權利屬于浙江大學,未經浙江大學許可,擅自商用是侵權行為。如果您想購買此專利、獲得商業授權和技術合作,請聯系【客服】
本文鏈接:http://www.17sss.com.cn/pat/books/201110260328.3/1.html,轉載請聲明來源鉆瓜專利網。
- 上一篇:空氣動力氣車
- 下一篇:喹啉亞胺類IVB族單茂配合物及其制備方法與應用





