技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及一種Endoglin抗體偶聯(lián)的脂質(zhì)體，尤其是涉及一種Endoglin抗體偶聯(lián)的脂質(zhì)體及其制備方法和應(yīng)用。

背景技術(shù)

在腫瘤的診斷、藥物治療和基因治療中，尋找理想的腫瘤靶點和靶向載體一直是研究熱點。

Endoglin是20世紀80年代發(fā)現(xiàn)的一個和腫瘤新生血管相關(guān)的膜表面同型二聚體糖蛋白分子(分子量約為180kDa)，是轉(zhuǎn)化生長因子-β1(transforming?growth?factor-β1，TGF-β1)和細胞表面受體結(jié)合時的輔助分子。Endoglin和TGF-β1結(jié)合后，可調(diào)節(jié)TGF-β1和其受體結(jié)合后下游的信號傳導(dǎo)途徑，從而促進腫瘤新生血管生成。現(xiàn)已有許多研究表明：Endoglin主要分布于新生血管的內(nèi)皮細胞和腫瘤周圍組織的細胞表面，其它正常組織幾乎均不表達。因此，Endoglin和腫瘤血管生成密切相關(guān)，是腫瘤血管生成的標志性分子之一。由于不同組織來源的腫瘤新生血管均起源于內(nèi)皮細胞，各種腫瘤的新生血管具有均質(zhì)性，所表達的特異抗原物質(zhì)具有共性，這樣就可避免不同腫瘤由于遺傳物質(zhì)在不斷突變所導(dǎo)致的不同組織起源的腫瘤抗原的異質(zhì)性，因此針對腫瘤新生血管的治療手段有可能應(yīng)用于各種腫瘤。可見，Endoglin是腫瘤抗血管治療和靶向治療的理想靶點，具有誘人的臨床應(yīng)用前景。

Pegylated?immunoliposomes(PILs)是經(jīng)聚乙二醇(PEG)修飾的、粒徑控制在100納米左右的納米免疫脂質(zhì)體，是一種新的非病毒基因轉(zhuǎn)移載體系統(tǒng)。在現(xiàn)有研究中，人們已經(jīng)將多種抗體結(jié)合在脂質(zhì)體上，制備出各種不同用途的免疫脂質(zhì)體材料。例如：2009年4月21日提交的中國發(fā)明專利申請200910103657.X公開了一種基于內(nèi)皮抑素基因的免疫脂質(zhì)體及其制備方法和應(yīng)用，該脂質(zhì)體結(jié)合了抗第VIII因子相關(guān)抗原單克隆抗體，可特異性作用于肺血管內(nèi)皮細胞，抑制血管生成和肺纖維化形成。又如：2009年7月21日提交的中國發(fā)明專利申請200910100763.2公開了一種CD19單克隆抗體免疫脂質(zhì)體的制備及用途，該脂質(zhì)體可以特異性作用于惡性B淋巴細胞和B淋巴細胞白血病干細胞。

然而，對于現(xiàn)有技術(shù)制備的用于腫瘤治療的免疫脂質(zhì)體材料所結(jié)合的抗體而言，其特異性抗原均只存在于特定種類的腫瘤細胞中，故這類脂質(zhì)體材料均只能針對特定種類的腫瘤細胞具有靶向性，其適用范圍也因此受到了極大限制。如果能夠?qū)⑶懊嫠龅腅ndoglin抗體與脂質(zhì)體進行偶聯(lián)，可以開發(fā)出一種新型的免疫脂質(zhì)體材料，該材料能夠以各類腫瘤組織中廣泛存在的新生血管內(nèi)皮細胞為靶向，因而對各類腫瘤均具有良好的靶向性。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的是提供一種可以特異性作用于腫瘤組織的新生血管內(nèi)皮細胞的Endoglin抗體偶聯(lián)的脂質(zhì)體。

本發(fā)明的另一目的是提供所述Endoglin抗體偶聯(lián)的脂質(zhì)體的制備方法。

本發(fā)明的另一目的是提供所述Endoglin抗體偶聯(lián)的脂質(zhì)體的應(yīng)用。

本發(fā)明所述Endoglin抗體偶聯(lián)的脂質(zhì)體包括納米脂質(zhì)體微粒、Endoglin抗體分子、將Endoglin抗體偶聯(lián)在納米脂質(zhì)體微粒上的偶聯(lián)劑以及納米脂質(zhì)體微粒裝載的質(zhì)粒DNA/抗腫瘤藥物/成像材料；所述Endoglin抗體偶聯(lián)的脂質(zhì)體中，各組分的質(zhì)量比為：納米脂質(zhì)體微粒∶Endoglin抗體分子∶偶聯(lián)劑/裝載的物質(zhì)＝(8～12)∶(0.8～1.2)∶(0.8～1.2)∶(0.1～0.3)。

所述納米脂質(zhì)體微粒的粒徑可為50～250nm。

所述Endoglin抗體分子可為單克隆抗體(monoclonal?antibody，mAb)或單鏈抗體(single-chain?antibody，ScAb)，分子量可為20～180k道爾頓。

所述納米脂質(zhì)體微粒裝載的物質(zhì)可選自攜帶抗腫瘤目的基因的質(zhì)粒、蛋白質(zhì)或多肽、腫瘤治療藥物、腫瘤組織成像材料中的至少一種等，其包封率可為3％～70％，載藥量可為0.7％～3％。

所述偶聯(lián)劑可為聚乙二醇衍生物等，所述聚乙二醇衍生物可選自二硬脂酰磷脂酰乙醇胺-聚乙二醇(DSPE-PEG)或二硬脂酰磷脂酰乙醇胺-聚乙二醇-馬來酰亞胺(DSPE-PEG-maleimide)等PEG衍生物，偶聯(lián)劑的PEG的分子量可為1000～4000。

本發(fā)明所述Endoglin抗體偶聯(lián)的脂質(zhì)體的制備方法包括以下步驟：

1)制備PEG修飾的磷脂薄層；

2)裝入質(zhì)粒/藥物/成像材料，制備納米脂質(zhì)體顆粒；

3)納米脂質(zhì)體顆粒的均一化和純化；