[發(fā)明專利]Endoglin抗體偶聯(lián)的脂質(zhì)體及其制備方法和應(yīng)用有效
| 申請?zhí)枺?/td> | 201010579418.4 | 申請日: | 2010-12-01 |
| 公開(公告)號: | CN102008441A | 公開(公告)日: | 2011-04-13 |
| 發(fā)明(設(shè)計)人: | 趙永祥;卓慧欽;盧小玲 | 申請(專利權(quán))人: | 趙永祥 |
| 主分類號: | A61K9/127 | 分類號: | A61K9/127;A61K47/42;A61K48/00;A61K49/16;A61K49/18;A61P35/00 |
| 代理公司: | 廈門南強(qiáng)之路專利事務(wù)所 35200 | 代理人: | 馬應(yīng)森 |
| 地址: | 530021 廣*** | 國省代碼: | 廣西;45 |
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| 摘要: | |||
| 搜索關(guān)鍵詞: | endoglin 抗體 脂質(zhì)體 及其 制備 方法 應(yīng)用 | ||
1.Endoglin抗體偶聯(lián)的脂質(zhì)體,其特征在于包括納米脂質(zhì)體微粒、Endoglin抗體分子、將Endoglin抗體偶聯(lián)在納米脂質(zhì)體微粒上的偶聯(lián)劑以及納米脂質(zhì)體微粒裝載的質(zhì)粒DNA/抗腫瘤藥物/成像材料;所述Endoglin抗體偶聯(lián)的脂質(zhì)體中,各組分的質(zhì)量比為:納米脂質(zhì)體微粒∶Endoglin抗體分子∶偶聯(lián)劑/裝載的物質(zhì)=(8~12)∶(0.8~1.2)∶(0.8~1.2)∶(0.1~0.3)。
2.如權(quán)利要求1所述的Endoglin抗體偶聯(lián)的脂質(zhì)體,其特征在于所述納米脂質(zhì)體微粒的粒徑為50~250nm;
所述Endoglin抗體分子最好為單克隆抗體或單鏈抗體,分子量為20~180k道爾頓。
3.如權(quán)利要求1所述的Endoglin抗體偶聯(lián)的脂質(zhì)體,其特征在于所述納米脂質(zhì)體微粒裝載的物質(zhì)選自攜帶抗腫瘤目的基因的質(zhì)粒、蛋白質(zhì)或多肽、腫瘤治療藥物、腫瘤組織成像材料中的至少一種,其包封率為3%~70%,載藥量為0.7%~3%;
所述偶聯(lián)劑最好為聚乙二醇衍生物,所述聚乙二醇衍生物選自二硬脂酰磷脂酰乙醇胺-聚乙二醇或二硬脂酰磷脂酰乙醇胺-聚乙二醇-馬來酰亞胺PEG衍生物,偶聯(lián)劑的PEG的分子量為1000~4000。
4.如權(quán)利要求1所述的Endoglin抗體偶聯(lián)的脂質(zhì)體的制備方法,其特征在于包括以下步驟:
1)制備PEG修飾的磷脂薄層;
2)裝入質(zhì)粒/藥物/成像材料,制備納米脂質(zhì)體顆粒;
3)納米脂質(zhì)體顆粒的均一化和純化;
4)巰基化Endoglin抗體;
5)將Endoglin抗體分子偶聯(lián)在PEG修飾的納米脂質(zhì)體上。
5.如權(quán)利要求4所述的Endoglin抗體偶聯(lián)的脂質(zhì)體的制備方法,其特征在于在步驟1)中,所述制備PEG修飾的磷脂薄層的具體方法包括:用三氯甲烷將棕櫚酰油酰磷脂酰膽堿、雙十二烷基二甲基溴化銨、二硬脂酰磷脂酰乙醇胺-聚乙二醇2000和二硬脂酰磷脂酰乙醇胺-聚乙二醇2000-馬來酰亞胺分別配制成20mg/mL、5mg/mL、20mg/mL和10mg/mL的相應(yīng)濃度,并按18.6μmol、0.6μmol、0.6μmol和0.2μmol的量混合于樣品瓶中;充分混勻后,通氮氣流(時間應(yīng)不少于10min)除去有機(jī)溶劑,并不斷旋轉(zhuǎn)樣品瓶,直至形成磷脂薄層;而后置于旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀中真空蒸發(fā)2h。
6.如權(quán)利要求4所述的Endoglin抗體偶聯(lián)的脂質(zhì)體的制備方法,其特征在于在步驟2)中,所述裝入質(zhì)粒/藥物/成像材料,制備納米脂質(zhì)體顆粒的具體方法包括:往步驟1)所述樣品瓶中加入50mM、pH=7.0的TRIS-HCL緩沖液0.2mL,輕微旋轉(zhuǎn)和震蕩后,置水浴超聲波儀處理3min,充分重懸磷脂混合物,同時應(yīng)盡量避免氣泡的產(chǎn)生;依次逐滴加入待裝載的物質(zhì)350μg、終濃度為40%~80%的乙醇和200mM?CaCl2溶液,并使乙醇的終濃度達(dá)到35%(V/V)、CaCl2的終濃度達(dá)到4mM;將瓶蓋旋緊并密封,進(jìn)行5個循環(huán)的反復(fù)凍融,得到質(zhì)粒脂質(zhì)體,其中,每一個凍融循環(huán)包括5min液氮-2min?37℃水浴-4min室溫靜置;所述待裝載的物質(zhì)可選自攜帶抗腫瘤目的基因的質(zhì)粒、腫瘤治療藥物、腫瘤組織成像材料等中的至少一種。
7.如權(quán)利要求4所述的Endoglin抗體偶聯(lián)的脂質(zhì)體的制備方法,其特征在于在步驟3)中,所述納米脂質(zhì)體顆粒的均一化和純化的具體方法包括:將步驟2)得到的質(zhì)粒脂質(zhì)體依次通過膜擠出器中的400nm、100nm和50nm雙層微孔濾膜各20次、20次和21次;在HEPES緩沖液中透析2h回收得到的質(zhì)粒脂質(zhì)體,期間更換透析液一次。
8.如權(quán)利要求4所述的Endoglin抗體偶聯(lián)的脂質(zhì)體的制備方法,其特征在于在步驟4)中,所述巰基化Endoglin抗體的具體方法包括;將Endoglin抗體1.6mg與200μL?10mM的Traut’s?Reagent在避光室溫巰基化反應(yīng)1h,隨后超濾3次,除去Traut’s?Reagent的同時,將緩沖液置換成HEPES緩沖液;所述Endoglin抗體可為單克隆抗體或單鏈抗體,分子量可為20~180k道爾頓。
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