[發(fā)明專利]一種羧肽酶B的制備方法及其組合物無效
| 申請?zhí)枺?/td> | 201010170731.2 | 申請日： | 2005-10-11 |
| 公開（公告）號： | CN101921740A | 公開（公告）日： | 2010-12-22 |
| 發(fā)明（設(shè)計）人： | 李顯林;楊煒;王偉剛 | 申請（專利權(quán)）人： | 江蘇萬邦生化醫(yī)藥股份有限公司;上海復星醫(yī)藥（集團）股份有限公司 |
| 主分類號： | C12N9/48 | 分類號： | C12N9/48 |
| 代理公司： | 上海東亞專利商標代理有限公司 31208 | 代理人： | 董梅;孔德力 |
| 地址： | 221004 江蘇*** | 國省代碼： | 江蘇;32 |
| 權(quán)利要求書： | 查看更多 | 說明書： | 查看更多 |
| 摘要： | |||
| 搜索關(guān)鍵詞： | 一種 羧肽酶 制備 方法 及其 組合 | ||
1.一種羧肽酶B的制備方法，其特征在于，包括如下步驟：
(1)將豬凍胰臟機械粉碎后自溶16～24hr，加3倍量預冷丙酮處理2次，收集濾渣，然后用2～5倍量體積比1∶1的丙酮乙醚混合液處理，收集濾渣，干燥后獲得丙酮粉；
(2)丙酮粉加水攪拌，調(diào)節(jié)pH至7.0～8.0，抽提1～4hr，過濾或離心，收集清液；
(3)清液按1.5mol/L加入硫酸銨，放置1.5hr，過濾，收集濾液即為鹽析液；
(4)鹽析液上用平衡緩沖液預先平衡的疏水層析柱，上樣完畢，用平衡緩沖液平衡至A280nm吸光度值到基線后用洗脫緩沖液洗脫，檢測A280nm吸光度值，收集第一洗脫峰即得含羧肽酶B的疏水層析液，疏水層析的條件為：疏水層析介質(zhì)是Octyl?Sepharose?4?Fast?Flow，平衡緩沖液是20mmol/LTris-HCl、pH7.5～8.0、含1.5mol/L硫酸銨，洗脫緩沖液是20mmol/LTris-HCl、pH8.0，流速12cm/hr～16cm/hr；和，
(5)含羧肽酶B的疏水層析液上預先用20mmol/L?Tris-HCl、pH8.0平衡的DEAE?Sepharose?Fast?Flow陰離子交換層析柱，上樣完畢，用20mmol/LTris-HCl、pH7.5～8.0平衡至A280nm吸光度值到基線后，用洗脫緩沖液20mmol/L?Tris-HCl、pH7.5～8.0、NaCl線性梯度0-0.1M/5倍柱體積洗脫，流速為18cm/hr～24cm/hr，檢測A280nm吸光度值，收集含有羧肽酶B的洗脫液，即得羧肽酶B。
2.根據(jù)權(quán)利要求1的羧肽酶B的制備方法，其特征在于，步驟(4)中平衡緩沖液是20mmol/LTris-HCl、pH7.5、含1.5mol/L硫酸銨，洗脫緩沖液是20mmol/LTris-HCl、pH7.5，流速是16cm/hr；和步驟(5)中含羧肽酶B的疏水層析液上預先用20mmol/L?Tris-HCl、pH7.5平衡的DEAE?Sepharose?Fast?Flow陰離子交換層析柱，上樣完畢，用20mmol/L?Tris-HCl、pH7.5平衡至A280nm吸光度值到基線后，用洗脫緩沖液20mmol/L?Tris-HCl、pH7.5、NaCl線性梯度0-0.1M/5倍柱體積洗脫，流速24cm/hr。
3.根據(jù)權(quán)利要求1的羧肽酶B的制備方法，其特征在于，步驟(4)中平衡緩沖液是20mmol/LTris-HCl、pH8.0、含1.5mol/L硫酸銨，洗脫緩沖液是20mmol/LTris-HCl、pH8.0，流速是12cm/hr；和步驟(5)中含羧肽酶B的疏水層析液上預先用20mmol/L?Tris-HCl、pH7.5平衡的DEAE?Sepharose?FastFlow陰離子交換層析柱，上樣完畢，用20mmol/L?Tris-HCl、pH8.0平衡至A280nm吸光度值到基線后，用洗脫緩沖液20mmol/L?Tris?HCl、pH8.0、NaCl線性梯度0-0.1M/5倍柱體積洗脫，流速18cm/hr。?
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