1.一種從樣本中檢測靶核酸序列的方法，包括：

在一個擴增體系中擴增靶序列，所述的擴增體系包括至少一條標記的寡核苷酸探針，一對擴增引物和一個熱穩(wěn)定的且不具有5’核酸酶活性的DNA聚合酶；

所述標記的寡核苷酸探針與擴增的靶核酸雜交形成的熔解曲線分析中產(chǎn)生一個熔解譜；

所述標記的寡核苷酸探針包括一個報告標記和一個猝滅標記，當標記的寡核苷酸探針處于未與靶序列雜交的單鏈構(gòu)象時，猝滅標記能夠猝滅報告標記所發(fā)出的熒光；當標記的寡核苷酸探針與靶序列雜交時，形成雙鏈結(jié)構(gòu)，報告標記的熒光不能夠被猝滅，此時，報告標記的熒光強度要遠高于此寡核苷酸探針未與靶序列雜交而處于單鏈狀態(tài)時的熒光強度；

所述的擴增是不對稱擴增，擴增中一條引物的濃度高于另外一條與之配對引物的濃度。

2.按照權(quán)利要求1中的方法，所述的不對稱擴增是PCR，熱穩(wěn)定的且不具有5’核酸酶活性的DNA聚合酶是經(jīng)過修飾的、無5’核酸酶活性的Taq聚合酶。

3.按照權(quán)利要求1中的方法，所述猝滅標記是非熒光猝滅基團，它標記在寡核苷酸探針的3’末端；所述報告標記是熒光基團，它標記在寡核苷酸探針內(nèi)部的核苷酸殘基上或5’末端。

4.按照權(quán)利要求1中的方法，所述標記的寡核苷酸探針的熔解溫度(Tm)高于擴增引物的熔解溫度(Tm)值。

5.按照權(quán)利要求1中的方法，還包括在擴增期間，在每個循環(huán)實時檢測雜交依賴的熒光信號。

6.按照權(quán)利要求2中的方法，其中一對PCR引物的比例為小于1∶2.

7.按照權(quán)利要求1中的方法，其中引物對有一個退火溫度，寡核苷酸探針有一個Tm值，探針的Tm值高于引物的退火溫度0～20℃。

8.按照權(quán)利要求1中的方法，靶核酸序列與探針的雜交區(qū)域至少要包含一個、兩個甚至更多突變核苷酸、單核苷酸多態(tài)性(SNP)、缺失或插入。

9.一個用于實時監(jiān)測PCR反應(yīng)和/或進行熔解曲線分析的標記的寡核苷酸探針，包括：

所述標記的寡核苷酸探針包括一個報告標記和一個猝滅標記，當標記的寡核苷酸探針處于未與靶序列雜交的單鏈構(gòu)象時，猝滅標記能夠猝滅報告標記所發(fā)出的熒光；當標記的寡核苷酸探針與靶序列雜交時，形成雙鏈結(jié)構(gòu)，報告標記的熒光不能夠被猝滅，此時，報告標記的熒光強度要遠高于此寡核苷酸探針未與靶序列雜交而處于單鏈狀態(tài)時的熒光強度；

其中所述猝滅標記是非熒光猝滅基團，且標記在寡核苷酸探針的3’末端；

所述報告標記是熒光基團，它標記在寡核苷酸探針的內(nèi)部核苷酸殘基上或5‘末端；

所述寡核苷酸探針包括至少25個核苷酸；

所述報告標記和猝滅標記位于25個核苷酸以內(nèi)；

所述標記的寡核苷酸探針與熱穩(wěn)定的且不具有5’核酸酶活性的DNA聚合酶配合使用。

10.一個從樣本中檢測靶核酸序列的試劑盒，包括：

①至少一條標記的寡核苷酸探針，標記的寡核苷酸探針包括一個報告標記和一個猝滅標記，當標記的寡核苷酸探針處于未與靶序列雜交的單鏈構(gòu)象時，猝滅標記能夠猝滅報告標記所發(fā)出的熒光；當標記的的寡核苷酸探針與靶序列雜交時，形成雙鏈結(jié)構(gòu)，報告標記的熒光不能夠被猝滅，此時，報告標記的熒光強度要遠高于此寡核苷酸探針未與靶序列雜交而處于單鏈狀態(tài)時的熒光強度；

其中所述標記的寡核苷酸探針的熔解溫度(Tm)高于擴增引物的熔解溫度(Tm)值；

其中所述猝滅標記是非熒光猝滅基團，且標記在寡核苷酸探針的3’末端；

其中所述報告標記是熒光基團，它標記在寡核苷酸探針的內(nèi)部核苷酸殘基上或5’末端；

②熱穩(wěn)定的且不具有5’核酸酶活性的DNA聚合酶及核酸序列擴增所需其余常用各組分。