[發(fā)明專利]一種快速檢測產(chǎn)腸毒素大腸桿菌的試劑盒及方法無效
| 申請?zhí)枺?/td> | 200910216682.9 | 申請日： | 2009-12-10 |
| 公開（公告）號： | CN101974616A | 公開（公告）日： | 2011-02-16 |
| 發(fā)明（設(shè)計）人： | 李玉鋒;何洋;代娟;萬紅梅 | 申請（專利權(quán)）人： | 西華大學 |
| 主分類號： | C12Q1/68 | 分類號： | C12Q1/68;C12Q1/10;G01N21/82;G01N21/78 |
| 代理公司： | 北京律誠同業(yè)知識產(chǎn)權(quán)代理有限公司 11006 | 代理人： | 李高峽 |
| 地址： | 610039 四*** | 國省代碼： | 四川;51 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關(guān)鍵詞： | 一種 快速 檢測 毒素 大腸桿菌 試劑盒 方法 | ||
1.一種檢測產(chǎn)腸毒素大腸桿菌的試劑盒，其特征是：含有下列引物
SEQ?ID?NO：1?attacatttaagagcggcgc；
SEQ?ID?NO：2?ggttcctagcattagacatgcttt；
SEQ?ID?NO：3?gtgtatggaataataaaacccctaaagcaaactagttttcca；
SEQ?ID?NO：4?gtgtccttcatcctttcaatggcaggtcgaagtcccgggcagtc
可以特異性擴增來自產(chǎn)腸毒素大腸桿菌的基因。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的試劑盒，其特征是：所述產(chǎn)腸毒素大腸桿菌的基因為編碼不耐熱腸毒素的基因。
3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的試劑盒，其特征是：所述的不耐熱腸毒素基因序列如SEQ?ID?NO：5所示。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的試劑盒，其特征是：所述試劑盒還含有Mg2+。
5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的試劑盒，其特征是：含有顯色劑。
6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的試劑盒，其特征是：所述顯色劑是綠色核酸凝膠染液(SYBR?Green?I)鉬酸銨或硫酸銅。
7.一種快速檢測食品是否被產(chǎn)腸毒素大腸桿菌污染的方法，包括以下步驟：
1)提取待檢樣本中的DNA；
2)用引物對樣本中的DNA進行擴增，所述引物如SEQ?ID?NO：1～4所示；
3)對DNA擴增結(jié)果進行檢測。
8.根據(jù)權(quán)利要求7所述的檢測方法，其特征是：步驟2)的擴增條件為，dNTPs濃度為0.6mM，Bst酶添加量為8U，擴增溫度為55-65℃，擴增反應(yīng)最短反應(yīng)時間為40min。
9.根據(jù)權(quán)利要求7所述的檢測方法，其特征是：步驟3)所述的檢測DNA擴增結(jié)果的方法是：觀察是否生成焦磷酸鎂沉淀或沉淀顯色。
10.如SEQ?ID?NO：1～4所示寡核苷酸序列的用途，其特征是：其用于擴增或檢測來自病原體產(chǎn)腸毒素大腸桿菌的基因。
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