1.一種谷胱甘肽硫轉(zhuǎn)移酶基因型檢測方法，其特征在于，具體步驟為：

步驟1.檢測的樣品類型與采樣方法：

用采樣拭刮被測者口腔中左右兩腮各20次，以采集口腔粘膜上皮細(xì)胞樣本；

步驟2.基因組DNA的抽提方法：

采用硅膠吸附法抽提每一個被測者口腔上皮細(xì)胞樣本的基因組DNA，時間為2小時-2.5小時，經(jīng)電泳檢測后，肉眼可見清晰白色條帶即進(jìn)入下一步檢測；

步驟3.基因分型：

采用PCR技術(shù)、凝膠電泳技術(shù)以及熒光定量PCR技術(shù)對谷胱甘肽硫轉(zhuǎn)移酶類家族MU類GSTM1基因、THETA類GSTT1基因和PI類GSTP1基因位點進(jìn)行分型：

步驟3-1，PCR反應(yīng)體系：

將每一個被測者樣本放入1個反應(yīng)孔，加入PCR標(biāo)準(zhǔn)反應(yīng)體系，同時檢測GSTM1和GSTT1基因，Albumin基因作為陽性對照，標(biāo)準(zhǔn)反應(yīng)體系的引物濃度為10uM，反應(yīng)體系總體積為20ul，由PCR試劑5ul，GSTM1基因、GSTT1基因和Albumin基因的正反向引物各0.4ul，20ng/μl的步驟2得到的DNA模板3μl和去離子水9.6ul組成；

GSTM1基因正向和反向引物：

正向引物：GAACTCCCTGAAAAGCTAAGC

反向引物：GTTGGGCTCAAATATACGGTGG

GSTT1基因正向和反向引物：

正向引物：TTCCTTACTGGTCCTCACATCTC

反向引物：TCACCGGATCATGGCCAGCA

Albumin基因正向和反向引物：

正向引物：GCCCTCTGCTAACAAGTCCTAC

反向引物：GCCCTAAAAAGAAAATCCCCAATC

步驟3-2，PCR反應(yīng)條件：

將反應(yīng)孔在ABI9700型PCR擴(kuò)增儀上進(jìn)行反應(yīng)，反應(yīng)條件為95℃預(yù)熱15分鐘；再進(jìn)行35個循環(huán)的95℃、45秒；60℃、45秒；72℃、60秒；72℃、7分鐘后，降溫至4℃；

步驟3-3，將反應(yīng)孔在PCR擴(kuò)增儀反應(yīng)后的產(chǎn)物進(jìn)行電泳檢測：

a.1％瓊脂糖凝膠插小號孔梳子；

b.2000bpDNA標(biāo)記物6ul；

c.步驟3-2的PCR產(chǎn)物10ul加入電泳緩沖液1ul；

d.電泳電壓：120v；

e.電泳時間：20min拍攝一張電泳圖；30min拍攝一張電泳圖；GSTM1基因目的條帶為219bp；GSTT1基因目的條帶為480bp；Albumin基因目的條帶為350bp；

步驟3-4，熒光定量PCR反應(yīng)：

將每一個被測者樣本放入1個反應(yīng)孔，檢測GSTP1?rs1695位點基因多態(tài)性，并增設(shè)2個不含DNA模版的NTC空白對照孔；

在每一個反應(yīng)孔中加入試劑為熒光定量PCR反應(yīng)體系，總體積為10μl，即濃度為20ng/μl的DNA模板2μl、10×熒光定量PCR反應(yīng)緩沖液1μl、25mM合成DNA的四種脫氧核苷酸底物dNTP?0.1μl、25mM氯化鎂溶液0.5μl、Taq?DNA聚合酶0.02μl、20μM的正向引物和反向引物各0.5μl、10μM的帶VIC熒光A型探針和帶FAM熒光G型探針各0.25μl和去離子水4.88μl；

其中，帶FAM熒光G型探針序列為TGCAAATACaTCTCCC，帶FAM熒光G型探針序列為TGCAAATACgTCTCCC，GSTP1基因正向引物為CCTGGTGGACATGGTGAATGAC，反向引物為CCGCCTCATAGTTGGTGTAGATG；

將反應(yīng)孔和空白對照孔在ABI9700型PCR擴(kuò)增儀上進(jìn)行反應(yīng)，先進(jìn)行預(yù)熱：50℃、2分鐘，95℃、10分鐘，然后再進(jìn)行60個循環(huán)的95℃、30秒，60℃、1分鐘，反應(yīng)結(jié)束，取出后再放入ABI7900型熒光定量PCR儀上讀取樣品熒光量，得到在谷胱甘肽硫轉(zhuǎn)移酶P1rs1695圖；

步驟4：數(shù)據(jù)讀?。?/p>

在步驟3-3中得到的電泳圖中，觀察GSTM1基因以及GSTM1基因是否缺失；若存在GSTM1基因缺失或GSTM1基因缺失，谷胱甘肽硫轉(zhuǎn)移酶活性低；

將步驟3-4得到的谷胱甘肽硫轉(zhuǎn)移酶P1?rs1695圖與NTC空白對照進(jìn)行比較，存在純VIC熒光信號、VIC和FAM雜合熒光信號以及純FAM熒光信號，分別代表該位點三種不同的基因型，即AA基因型、AG基因型和GG基因型；若檢測結(jié)果點位于坐標(biāo)軸左上區(qū)域，則為GG基因型，若檢測結(jié)果點位于坐標(biāo)軸右上區(qū)域，則為AG基因型，若檢測結(jié)果點位于坐標(biāo)軸右下區(qū)域，則為AA基因型；若為GG基因型，谷胱甘肽硫轉(zhuǎn)移酶活性低。