[發(fā)明專利]60Coγ射線輻照微生物制備微生物油脂的方法無(wú)效
| 申請(qǐng)?zhí)枺?/td> | 200810223079.9 | 申請(qǐng)日: | 2008-09-26 |
| 公開(kāi)(公告)號(hào): | CN101353610A | 公開(kāi)(公告)日: | 2009-01-28 |
| 發(fā)明(設(shè)計(jì))人: | 劉宏娟;張建安;武敏敏;周玉杰;程可可 | 申請(qǐng)(專利權(quán))人: | 清華大學(xué) |
| 主分類號(hào): | C11B1/00 | 分類號(hào): | C11B1/00;C12P7/64 |
| 代理公司: | 北京華誼知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理有限公司 | 代理人: | 劉月娥 |
| 地址: | 100084北*** | 國(guó)省代碼: | 北京;11 |
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| 摘要: | |||
| 搜索關(guān)鍵詞: | sup 60 co 射線 輻照 微生物 制備 油脂 方法 | ||
1、一種60Coγ射線輻照微生物制備微生物油脂的方法,其特征在于,工藝步驟包括:
(1)將產(chǎn)油微生物用無(wú)菌水洗下菌體,顯微鏡計(jì)數(shù)調(diào)節(jié)細(xì)胞濃度為5-7×106個(gè)/mL,制備菌懸液;或?qū)⑿泵媾囵B(yǎng)的產(chǎn)油微生物接入液體培養(yǎng)基中,振蕩培養(yǎng)14-16h,3000-5000r/min離心,棄去上清液,用高滲緩沖液洗滌,將離心后的菌體用0.1-0.3%β-巰基乙醇和0.1-0.5%的EDTA預(yù)處理菌體;然后再用1-2%蝸牛酶和0.1-0.5%溶菌酶及0.1-0.5%纖維素水解酶混合酶液處理菌懸液10-20h制備原生質(zhì)體,原生質(zhì)體形成率大于90%時(shí),離心去酶液,用高滲緩沖液洗滌,懸浮原生質(zhì)體;
(2)將制備的細(xì)胞懸液或原生質(zhì)體懸浮于高滲緩沖液中,用60Coγ射線輻照,輻照劑量100-1000Gy,劑量率3-5Gy/min,誘變后稀釋10-3-10-6涂布于完全培養(yǎng)基上,于30-35℃黑暗條件下避光培養(yǎng)2-3d;
(3)將培養(yǎng)好的菌落進(jìn)行初篩,從致死率大于90%的照射劑量下再生的菌落里挑選大于3mm的突變株進(jìn)行復(fù)篩。
(4)將初篩得到的菌落接入種子培養(yǎng)基30-35℃,100-250r/min培養(yǎng)18-24h,以5%-10%體積接種量接入發(fā)酵培養(yǎng)基;在30-35℃、100-250rmp下振蕩培養(yǎng)48-72h,發(fā)酵結(jié)束后,發(fā)酵液3000-5000r/min離心收集菌體,并提取微生物油脂,篩選高產(chǎn)菌株。
2.按照權(quán)利要求1所述的方法,其特征在于:所述產(chǎn)油微生物包括粘紅酵母,斯達(dá)凱依酵母、被孢霉或拉曼被孢霉。
3.按照權(quán)利要求1所述的方法,其特征在于:所述高滲緩沖液其成份為:0.1mol/L?pH?6.0磷酸緩沖液,0.8mol/L甘露醇。
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