背景技術(shù)

本發(fā)明總體而言涉及分子生物學(xué)、神經(jīng)生物學(xué)和藥理學(xué)領(lǐng)域以及帕金 森病(Parkinson’s?Disease，PD)的診斷、預(yù)后或預(yù)防性/治療性治療。

帕金森病是一種進(jìn)行性的神經(jīng)退行性疾病，其特征為黑質(zhì)中多巴胺神 經(jīng)元缺失和存活神經(jīng)元中存在細(xì)胞質(zhì)內(nèi)含物(路易體，Lewy?bodies)。帕 金森病的經(jīng)典臨床特征包括進(jìn)行性震顫、強(qiáng)直和運(yùn)動(dòng)遲緩。然而，在其早 期階段，由于缺乏臨床癥狀和可信的生物標(biāo)志物使得PD很難被診斷。另 外，PD可能被誤診為其它一些疾病，包括，但不僅限于，例如：特發(fā)性 震顫和多系統(tǒng)萎縮等，這進(jìn)一步干擾了任何潛在診斷。PD診斷可以基于 神經(jīng)表現(xiàn)，這些只在大腦脆弱區(qū)域內(nèi)實(shí)體細(xì)胞損失之后才顯現(xiàn)出來(lái)。

發(fā)明概要

本發(fā)明總體而言涉及樣品的分析測(cè)試以及用于PD診斷、預(yù)后或者預(yù) 防性/治療性治療的生物標(biāo)志物說(shuō)明的各個(gè)方面。其中一個(gè)方面，本文提供 了一種診斷或監(jiān)測(cè)帕金森病的方法，其包括：(a)確定在一個(gè)或多個(gè)時(shí)間 點(diǎn)取自受試者的樣品中Bmal1或Per1的表達(dá)水平，和(b)將樣品中Bmal1 或Per1的表達(dá)水平和參考水平相比較，其中樣品中Bmal1或Per1表達(dá)水 平和參考水平的差異指示出受試者患有帕金森病或其分級(jí)。

在一個(gè)實(shí)施方案中，所述參考水平是指未患帕金森病的受試者對(duì)照群 體中Bmal1或Per1的表達(dá)水平。在一個(gè)實(shí)施方案中，所述參考水平是指 未患帕金森病的個(gè)體中Bmal1或Per1的表達(dá)水平。在一個(gè)實(shí)施方案中， 所述參考水平是指受試者之前的Bmal1或Per1的表達(dá)水平。在一個(gè)實(shí)施 方案中，所述參考水平是指受試者在接受治療方案之前Bmal1或Per1的 表達(dá)水平。

在一個(gè)實(shí)施方案中，所述樣品為血液樣品。在一個(gè)說(shuō)明性實(shí)施方案中， 所述樣品包含外周白細(xì)胞。

在一個(gè)實(shí)施方案中，測(cè)量表達(dá)水平的步驟是通過(guò)定量PCR實(shí)施。在一 個(gè)實(shí)施方案中，測(cè)量表達(dá)水平的步驟是通過(guò)northern印跡或點(diǎn)印跡實(shí)施。

在一個(gè)實(shí)施方案中，測(cè)定表達(dá)水平的步驟包括將Bmal1或Per1的 mRNA的量相對(duì)于管家基因mRNA的量進(jìn)行歸一化。在一個(gè)實(shí)施方案中， 所述管家基因選自：hCDK4、β-肌動(dòng)蛋白、3-磷酸甘油醛脫氫酶和18S rRNA。

在一個(gè)實(shí)施方案中，所述一個(gè)或多個(gè)時(shí)間點(diǎn)包括至少一個(gè)處于晝夜循 環(huán)中夜間部分的時(shí)間點(diǎn)。在一個(gè)實(shí)施方案中，所述一個(gè)或多個(gè)時(shí)間點(diǎn)包括 選自約23:00至約9:00之間的至少一個(gè)時(shí)間點(diǎn)。在一個(gè)實(shí)施方案中，所述 一個(gè)或多個(gè)時(shí)間點(diǎn)來(lái)自選自下列的時(shí)間段：20:00到22:00，23:00到1:00， 5:00到7:00，以及8:00到10:00。在一個(gè)舉例性實(shí)施方案中，所述一個(gè)或 多個(gè)時(shí)間點(diǎn)選自：約21:00、約00:00、約06:00和約09:00。 ??在一個(gè)實(shí)施方案中，比較Bmal1或Per1表達(dá)水平與參考水平的步驟 是通過(guò)Mann-Whitney?U檢驗(yàn)來(lái)實(shí)施的。在一個(gè)實(shí)施方案中，受試者Bmal1 或Per1表達(dá)水平與參考水平的差異與受試者帕金森病分級(jí)正相關(guān)。在一個(gè) 實(shí)施方案中，帕金森病分級(jí)是通過(guò)Hoehn?&?Yahr分級(jí)系統(tǒng)測(cè)定的。在一 個(gè)實(shí)施方案中，確定受試者是否患有帕金森病或其分級(jí)的步驟是對(duì)Hoehn &?Yahr分級(jí)系統(tǒng)所確定的分級(jí)和受試者Bmal1或Per1表達(dá)水平與參考水 平的差異之間進(jìn)行Pearson相關(guān)性分析。在一個(gè)實(shí)施方案中，帕金森病的 分級(jí)通過(guò)UPDRS量表進(jìn)行評(píng)價(jià)。

在一個(gè)實(shí)施方案中，相比于參考水平，受試者Bmal1表達(dá)水平在選自 約21:00、約00:00和約06:00的一個(gè)或多個(gè)時(shí)間點(diǎn)處降低指示出受試者患 有帕金森病或其分級(jí)。在一個(gè)實(shí)施方案中，相比于參考水平，受試者Per1 表達(dá)水平在約00:00、約06:00或同時(shí)在約00:00和約06:00時(shí)升高指示出 受試者患有帕金森病或其分級(jí)。在一個(gè)實(shí)施方案中，相比于參考水平，受 試者Per1表達(dá)水平在21:00時(shí)降低指示出受試者患有帕金森病或其分級(jí)。

在一些示例性實(shí)施方案中，所述方法另外包括通過(guò)測(cè)量來(lái)源于受試者 取自至少兩個(gè)時(shí)間點(diǎn)之間的樣品中Per1和/或Bmal1的表達(dá)水平以及比較 至少兩個(gè)時(shí)間點(diǎn)之間Per1和/或Bmal1的表達(dá)水平來(lái)確定受試者中Per1和 /或Bmal1表達(dá)模式的步驟。在一個(gè)實(shí)施方案中，受試者Per1在約21:00 和約00:00時(shí)表達(dá)水平比約06:00和09:00時(shí)低的表達(dá)模式指示出受試者患 有帕金森病。