技術領域

本發明屬于臨床血液免疫檢測技術領域，具體地，本發明提供了一種前列腺酸性磷酸酶化學發光免疫分析測定試劑盒及其制備方法。本發明的試劑盒具有簡便、快速、靈敏、穩定等優點。該試劑盒檢測的靈敏度高，特異性強。

背景技術

前列腺癌在歐美國家因腫瘤而死亡的男性中，僅次于肺癌，排第二位。在我國隨著衛生檢驗的發展，前列腺癌普查也提上日程。前列腺酸性磷酸酶是男性血清酸性磷酸酶的主要來源，是只由前列腺上皮細胞溶酶體產生的一種同工酶，是一種糖蛋白，由兩個亞基構成，相對分子量約為100?000，主要分布在精液和尿中，血清中含量較低，具有組織特異性，一度被認為是前列腺癌特異性最敏感的腫瘤標志物，廣泛用于前列腺癌診斷和治療監控。近來的研究表明，它并不是絕對的組織特異性標志物。在臨床上，前列腺炎在惡性和良性病變之間重疊較大，不宜單獨作為前列腺癌早期診斷的有效篩選指標。用以聯檢，結合前列腺特異抗原密度測量、直腸指診和直腸超等手段，能明顯提高前列腺癌篩查的靈敏度。因此該診斷試劑盒對前列腺癌的診斷、治療監測和預后判斷仍然具有一定臨床意義

近十年來標記免疫分析技術的研究和應用發展迅速，已廣泛應用于生物醫學基礎理論研究及臨床疾病診斷各領域。其中技術工藝成熟，具有先進性且實用性強，廣泛應用于PAP的定量分析的方法主要是放射免疫分析(RIA)和酶聯免疫吸附分析(ELISA)，其中RIA必須用¹²⁵I等放射性元素標記，檢測設備復雜昂貴，必須用專門的儀器測定，其放射性核素的半衰期短，不能長期保存，測定結果不穩定，同時也給實驗操作人員帶來了放射性傷害。ELISA檢測靈敏度不夠高，檢測范圍窄，影響因素較多，易造成假陰性和假陽性等缺點也不能滿足臨床的要求。化學發光免疫分析方法(CLIA)應運而生。

化學發光分析超微量物質，尤其是臨床分析微量的活性物質始于20世紀70年代，隨后在臨床上的應用進入一個飛速發展的時期。化學發光免疫分析方法(CLIA)靈敏度高，可以達到10^-18mol/L；快速，發光信號在幾秒鐘內產生；操作簡便，測試過程中不使用有害試劑。

本發明是在酶聯免疫分析的基礎上應用酶催化發光底物，通過檢測發光底物產生的光信號代替酶聯免疫分析中的顯色底物，其靈敏度得到大大提高。本發明所述方法操作簡便，適用性廣，可實現大批量快檢測，使用成本低，更易在臨床診斷和科研工作推廣應用。

發明內容

本發明的目的是提供一種前列腺酸性磷酸酶化學發光免疫分析測定試劑盒以及該試劑盒的制備方法。

為達到上述目的，本發明采用如下方案：

根據本發明的前列腺酸性磷酸酶化學發光免疫分析測定試劑盒包括：前列腺酸性磷酸酶校準品；前列腺酸性磷酸酶單克隆抗體包被的固相載體；酶標記的前列腺酸性磷酸酶單克隆抗體；上述酶所作用的化學發光底物；以及洗滌液。

前列腺酸性磷酸酶系列校準品以小牛血清為基質，加入前列腺酸性磷酸酶純品配制而成，前列腺酸性磷酸酶單克隆抗體，溶于碳酸鹽緩沖液中，然后包被在固相抗體上，另一株前列腺酸性磷酸酶單克隆抗體和酶偶聯形成酶標記抗體。

固相載體可以為微孔板、塑料珠或塑料管。

標記抗體所用標記酶可以為堿性磷酸酶或辣根過氧化物酶。其中堿性磷酸酶標記采用改良的戊二醛交聯法，辣根過氧化物酶標記采用高碘酸鈉氧化法，所得酶標記抗體工作濃度為1：2000-10000。

根據本發明的前列腺酸性磷酸酶化學發光免疫分析測定試劑盒制備方法，包括以下步驟：配制前列腺酸性磷酸酶校準品；以前列腺酸性磷酸酶單克隆抗體包被固相載體；以酶標記前列腺酸性磷酸酶單克隆抗體；上述前列腺酸性磷酸酶校準品、酶標記的前列腺酸性磷酸酶單克隆抗體和該酶所作用的化學發光底物的分裝；以及組裝為成品。

根據本發明的方法，所述校準品配制過程包括以下步驟：

1)基質溶液

基質溶液采用100％小牛血清滅活、離心、過濾，加0.1％Proclin300。

2)校準品配制以及濃度校正

前列腺酸性磷酸酶純品，加入校準品基質溶液，配制一中間濃度校準品濃溶液，然后采用逐點稀釋的方法，配制成0，2，5，10，25，60ng/mL的系列校準品，校準品用國家標準校正。

根據本發明的方法，所述包被固相載體的過程包括以下步驟：

1)包被

采用0.05mol/L，pH值為9.6的碳酸鹽緩沖液與適當濃度的前列腺酸性磷酸酶單抗混合制成包被液，并將其負載于固相載體上，固相載體為微孔板、塑料珠或塑料管。