技術領域

本發明屬于免疫病理學檢測領域，更具體涉及運用兩種技術在同一標本上檢測同一抗原表達的方法，該方法的應用范圍適合于檢測人體和動物的新鮮組織、石蠟包埋組織和不同細胞系內的抗原表達情況。

背景技術

免疫組織化學(immunohistochemistry)又稱免疫細胞化學(immunocytochemistry)，是應用免疫學基本原理——抗原抗體反應，即指帶顯色劑(熒光素、酶、金屬離子、同位素)標記的特異性抗體在組織細胞原位通過抗原抗體反應和組織化學的呈色反應，對相應抗原進行定性、定位、定量測定的一項技術。它把免疫反應的特異性、組織化學的可見性巧妙地結合起來，借助顯微鏡(包括熒光顯微鏡、電子顯微鏡)的顯像和放大作用，在細胞、亞細胞水平檢測各種抗原物質(如蛋白質、多肽、酶、激素、病原體以及受體等)。免疫組織化學技術按照標記物的種類可分為免疫熒光、免疫酶、免疫鐵蛋白、免疫金及放射免疫自影技術等。用于病理診斷的主要有免疫熒光和免疫酶技術。

免疫熒光技術：是最早建立的免疫組織化學技術。它利用抗原抗體特異性結合的原理，先將已知抗體標上熒光素，以此作為探針檢查細胞或組織內的相應抗原，在熒光顯微鏡下觀察。當抗原抗體復合物中的熒光素受激發光的照射后即會發出一定波長的熒光，從而可確定組織中某種抗原的定位，進而還可進行定量分析。由于免疫熒光技術特異性強、靈敏度高、快速簡便，所以在臨床病理診斷、檢驗中應用比較廣范。但是，由于免疫熒光法必須具有熒光顯微鏡，熒光強度隨時間的延長而逐漸消退，結果不易長期保存等缺點，在普及應用上受到一定限制，而逐漸被免疫酶法所取代。

免疫酶技術：是繼免疫熒光后，于20世紀60年代發展起來的技術。基本原理是先以酶標記的抗體與組織或細胞作用，然后加入酶的底物，生成有色的不溶性產物或具有一定電子密度的顆粒，通過光鏡或電鏡，對細胞表面和細胞內的各種抗原成分進行定位研究。本方法與免疫熒光技術相比的主要優點是：定位準確，對比度好，染色標本可長期保存，適合于光、電鏡研究等。

免疫酶技術是目前最常用的方法。免疫酶技術的發展非常迅速，已經衍生出了多種標記方法，且隨著方法的不斷改進和創新，其特異性和靈敏度都在不斷提高，使用也越來越方便。目前在病理診斷中廣為使用的當屬PAP法、ABC法、SP法等。

最近幾年根據相關報道偶然發現的熒光半導體納米顆粒被稱為量子點(quantum?dots，QDs)提供了一種潛在的方法去克服傳統的熒光素如有機熒光基團的激發波長范圍很窄、發光時間短，容易猝滅等缺點，開始在免疫熒光分析中初步應用，并取得了令人滿意的效果。量子點又叫半導體納米微晶體，目前應用較多的是II-VI族或III-V族元素組成的納米微粒，主要有CdY(Y為S，Se，Te)，還有一些復合結構以及多層結構。與傳統的標記試劑相比，量子點具有以下特性：①具有尺度效應和優良的發光性能。量子點是多電子體系，發光效率遠高于單個分子，發射光是有機熒光染料的20倍，穩定性強100倍以上，可以經受反復多次激發，不像有機熒光染料和鑭系元素的熒光容易猝滅。量子點對光漂白的抵抗能力強，熒光壽命長。②量子點具有良好的生物兼容性。用量子點做標記物對生物大分子標本的活性無傷害，而且量子點與生物大分子的耦聯方法和方式相對比較單一，包括利用化學鍵和靜電力進行偶聯，不象傳統的標記試劑，每種試劑都需要特定的耦聯方法。

目前，幾乎所有運用免疫熒光技術和免疫酶技術檢測抗原表達的文獻報道中，都是在兩個標本上分別進行的，這樣會使實驗條件不一致，也會使分別運用這兩種技術檢測到的結果有偏差。同時，耗費了更多的人力、物力。然而，到目前為止，還未發現類似我們在同一標本上先后運用免疫熒光技術和免疫酶技術檢測同一抗原表達的報道。

發明內容

本發明的目的是在于提供了一種在同一標本上檢測同一抗原表達的方法，采用免疫熒光技術和免疫酶技術檢測同再抗原的表達。本方法利用量子點標記鏈霉親和素，適用性更廣，從而能在免疫熒光技術檢測到抗原表達并分析結果之后還能繼續進行免疫酶技術的檢測并也能顯示同一抗原表達的部位，與免疫熒光技術的檢測結果一致。