1.一種雜交瘤細胞單克隆制備的篩選方法，其特征在于

(1)配制2倍DMEM基礎培養液：取Dulbecco改良型培養基干粉即DMEM干粉10～15克，加純水300～500毫升，加入3～5克碳酸氫鈉并充分攪拌溶解，用0.5～1.5摩爾每升鹽酸和0.5～1.5摩爾每升氫氧化鈉調節pH至7.0～7.4，過濾除菌，制得2倍DMEM基礎培養液；

(2)配制L-谷氨酰胺母液：稱取L-谷氨酰胺1～10克，加純水50-300毫升并加熱至完全溶解，除菌過濾，配制得濃度為200毫摩爾每升L-谷氨酰胺母液，按每管4毫升分裝，冷凍保存；

(3)配制β-巰基乙醇母液：取50～80微升β-巰基乙醇，加入到50-120毫升純水中，過濾除菌，配制得10毫摩爾每升母液，冷凍保存；

(4)配制甲基纖維素水溶液：稱取0.6～2.4克4000cp甲基纖維素或羥丙基甲基纖維素，量取純水，分別在121～126℃滅菌30分鐘，無菌條件下量取17.5～70毫升已滅菌純水加入到甲基纖維素中，2～8℃低溫條件下攪拌20～24小時；

(5)HAT半固體培養基配制：在步驟(4)配制的甲基纖維素水溶液中加入步驟(1)配制的2倍DMEM基礎培養液15～60毫升，加入步驟(2)配制的L-谷氨酰胺母液0.25～1毫升，加入步驟(3)配制的β-巰基乙醇母液0.5～2毫升，再加入：胎牛血清10～40毫升，市售的100倍MEM非必需氨基酸0.5～2毫升，10000單位每毫升青霉素和10000微克每毫升鏈霉素混合水溶液0.5～2毫升，加入市售的50倍次黃嘌呤-氨基喋呤-胸腺嘧啶溶液1～4毫升，2～8℃攪拌3～6小時，即得到HAT半固體培養基，也即雜交瘤細胞單克隆化半固體培養基；

(6)融合后的細胞放置35～38℃預培養16～24小時，然后用5～20毫升預熱至35～38℃的步驟(1)配制的2倍DMEM基礎培養液混勻，加入人類堿性成纖維細胞生長因子200-800納克，再加入雜交瘤融合及克隆因子即HFCS?0.5～2毫升，混勻，再與步驟(5)配制的HAT半固體培養基輕輕混勻，35～38℃靜置10～30分鐘并排除氣泡，分裝到平皿并于37℃下5％的CO₂條件下培養；

(7)培養9～14天，其間不得將平皿或培養板拿出培養箱觀察，待皿中已長出肉眼可見的克隆集落，用微量移液器將克隆從該培養基中吸取，移至細胞培養板采用液體放大培養，每孔移入1個克隆，待細胞長至滿孔底1/2～2/3時，吸取培養上清進行陽性檢測，選擇陽性孔直接放大凍存，進一步進行抗體特性鑒定或腹水生產。

2.按權利要求1所述的雜交瘤細胞單克隆制備的篩選方法，其特征在于所述的平皿為直徑35mm平皿或6孔細胞培養板。

3.按權利要求1或2所述的雜交瘤細胞單克隆制備的篩選方法，其特征在于

(1)2倍DMEM基礎培養液配制：取DMEM?13.4克，加純水500毫升，加入3.8克碳酸氫鈉并充分攪拌溶解，用1摩爾每升鹽酸和1摩爾每升氫氧化鈉調pH至7.2，過濾除菌，制得2倍DMEM基礎培養液；

(2)L-谷氨酰胺母液配制：稱取L-谷氨酰胺5.8克，加純水200毫升，加熱至50℃使完全溶解，除菌過濾，得到200毫摩爾每升L-谷氨酰胺母液，按每管4毫升分裝，放-20℃保存；

(3)β-巰基乙醇母液配制：取70微升β-巰基乙醇，加入100毫升純水中，過濾除菌，得到10毫摩爾每升β-巰基乙醇母液，-20℃保存；

(4)甲基纖維素水溶液配制：取4000cp甲基纖維素0.6克和超純水25毫升于121～126℃滅菌30分鐘，無菌條件下取12.5毫升已滅菌純水輕輕加入到甲基纖維素中，4℃低溫條件下磁力攪拌24小時；

(5)HAT半固體培養基配制：向步驟4的最終溶液中加入步驟1配制的2倍DMEM基礎培養液16毫升，步驟2配制的L-谷氨酰胺母液0.27毫升，步驟3配制的β-巰基乙醇母液0.5毫升，胎牛血清12毫升，MEM非必需氨基酸0.5毫升，10000單位每毫升青霉素加10000微克每毫升鏈霉素混合水溶液0.5毫升，市售50倍HAT溶液1毫升，4℃磁力攪拌4小時；

(6)融合后細胞放置37℃預培養18小時，然后用5毫升預熱至37℃的步驟1配制的終溶液混勻，加入人類堿性成纖維細胞生長因子(bFGF)200納克，HFCS0.5毫升，混勻后，與步驟5配制的HAT半固體培養基混合均勻，37℃靜置20分鐘并排除氣泡，分裝于平皿中，放置在37℃、5％的CO₂條件下培養；

(7)培養9～14天，其間不得將平皿或培養板拿出培養箱觀察，待皿中長出肉眼可見的克隆集落，用微量移液器將克隆從該培養基中吸取，移至96孔細胞培養板液體放大培養，每孔移入1個克隆，待長至滿孔底1/2～2/3時，吸取培養上清進行陽性檢測，選擇陽性孔直接放大凍存，進一步進行抗體特性鑒定或腹水生產。