[發明專利]一種洋水仙脫毒組培鱗莖的培養方法無效
| 申請號: | 200710306830.7 | 申請日: | 2007-12-28 |
| 公開(公告)號: | CN101213938A | 公開(公告)日: | 2008-07-09 |
| 發明(設計)人: | 陳劍平;徐剛;鄭紅英;林林;汪一婷;程曄;呂永平;牟豪杰 | 申請(專利權)人: | 浙江省農業科學院 |
| 主分類號: | A01H4/00 | 分類號: | A01H4/00;A01G31/00;C12N5/04 |
| 代理公司: | 杭州豐禾專利事務所有限公司 | 代理人: | 沈伾伾 |
| 地址: | 310021*** | 國省代碼: | 浙江;33 |
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| 摘要: | |||
| 搜索關鍵詞: | 一種 水仙 脫毒 鱗莖 培養 方法 | ||
1.一種洋水仙脫毒組培鱗莖的培養方法,其特征在于按如下步驟進行:
(1)培養基的配制,包括基本培養基和組培各階段培養基的各組分與每升所含重量為:
1)基本培養基:子鱗莖誘導、增殖及鱗莖生長培養基用MS培養基;生根培養基用1/2?MS培養基;其中,蔗糖或白糖20~40g/L,瓊脂7~9g/L,pH5.6~5.8;
2)子鱗莖誘導培養基:MS+BA?0.1~1mg/L和NAA?0.05~0.5mg/L;
3)子鱗莖增殖培養基:MS+BA?0.05~0.5mg/L和NAA?0.1~1mg/L;
4)鱗莖生長培養基:MS+BA?0.01~0.1mg/L和NAA?0.05~0.5mg/L;
5)生根培養基:1/2MS+NAA?0.1~0.5mg/L;
(2)洋水仙脫毒組培鱗莖的培養:
1)鱗莖低溫處理:鱗莖經8℃低溫處理2~4周;
2)鱗莖萌芽:將低溫處理后的鱗莖放在25℃培養室內,培養1~2周,使鱗莖快速萌芽;
3)外植體的選取與滅菌:取3~5cm的鱗莖幼芽,經滅菌處理后,在無菌條件下,摘出0.2~0.3mm帶1~2個葉原基的莖尖作為脫毒組培用外植體;
4)莖尖誘導培養:將外植體接種在子鱗莖誘導培養基上,在培養條件下培養1~2個月,從莖尖誘導形成幼芽或子鱗莖;
5)子鱗莖增殖培養:將幼芽或子鱗莖轉接到子鱗莖增殖培養基上,在培養條件下培養30~45天至增殖出子鱗莖;根據對子鱗莖數量的需求,每隔30~45天按同樣方法進行子鱗莖再增殖;
6)子鱗莖生長培養:將子鱗莖轉接到子鱗莖生長培養基上,在培養條件下培養30~45天使鱗莖長大到0.5~1cm;
7)生根培養:將長大的子鱗莖轉接在生根培養基中,在培養條件下培養20~30天至子鱗莖上部長出葉片,基部長出數根根系;
8)移栽:當生根子鱗莖苗長高至3~5cm以上、長出5根以上根時,移栽至基質培養基,在培養條件下培養1~2個月后成苗;
(3)病毒ELISA檢測:
將田間洋水仙發生的病毒,經擴增、克隆和原核表達所獲得的相關病毒外殼蛋白,注射小鼠或家兔免疫并制備成病毒特異性抗血清后,對脫毒組培獲得的鱗莖苗進行病毒ELISA檢測。
2.按權利要求1所述的培養方法,其特征在于所述的培養基的配制,包括基本培養基和組培各階段培養基的各組分與每升所含重量為:
(1)基本培養基:子鱗莖誘導、增殖及鱗莖生長用MS培養基;生根用1/2MS培養基,其中,瓊脂8g/L,pH為5.7;
(2)子鱗莖誘導培養基:蔗糖30g/L的MS+BA?0.5mg/L和NAA?0.1mg/L;
(3)子鱗莖增殖培養基:白糖為40g/L的MS+BA?0.1mg/L和NAA?0.5mg/L;
(4)鱗莖生長培養基:白糖為40g/L的MS+BA?0.05mg/L和NAA?0.1mg/L;
(5)生根培養基:白糖為20g/L的1/2MS+NAA?0.25mg/L。
3.按權利要求1所述的培養方法,其特征在于所述的滅菌處理是,將鱗莖幼芽經75%酒精浸泡0.5~1.0分鐘,再用0.1%升汞水溶液浸泡10~15分鐘,最后用無菌水沖洗3~5次。
4.按權利要求1所述的培養方法,其特征在于所述的各脫毒組培階段的培養條件是,溫度為25±2℃,光強為1500~2500Lx,光照時間為10h/d。
5.按權利要求1所述的培養方法,其特征在于所述的移栽基質由泥炭∶珍珠巖∶蛭石按體積比1∶2∶2配制而成。
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