[發(fā)明專利]一種喹諾酮類抗生素多簇抗原的合成方法無效
| 申請?zhí)枺?/td> | 200710134500.4 | 申請日: | 2007-10-31 |
| 公開(公告)號: | CN101158680A | 公開(公告)日: | 2008-04-09 |
| 發(fā)明(設(shè)計)人: | 胥傳來;李雅麗;王燦輝;唐劍峰;陳偉;劉麗強;陶冠軍;秦昉 | 申請(專利權(quán))人: | 江南大學 |
| 主分類號: | G01N33/53 | 分類號: | G01N33/53;C07K14/765;C07K1/10;C07D215/233 |
| 代理公司: | 無錫市大為專利商標事務(wù)所 | 代理人: | 時旭丹;劉品超 |
| 地址: | 214028江蘇省無錫市*** | 國省代碼: | 江蘇;32 |
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| 摘要: | |||
| 搜索關(guān)鍵詞: | 一種 喹諾酮類 抗生素 抗原 合成 方法 | ||
1.一種喹諾酮類抗生素多簇抗原的合成方法,其特征是以諾氟沙星為原料將其衍生化制備半抗原,進而再與牛血清蛋白采用戊二醛法偶聯(lián)合成抗原;
工藝步驟為:
(1)人工半抗原的合成
合成路線:
產(chǎn)物1的合成:
2-溴乙胺氫溴酸鹽和碳酸二叔丁酯Boc2O反應,配比控制為碳酸二叔丁酯摩爾比過量20%,以甲醇為反應介質(zhì),三乙胺為催化劑,攪拌、加熱升溫到60℃,反應1h,然后室溫反應過夜;反應液真空濃縮,殘液溶于二氯甲烷,依次用0.5N的鹽酸、飽和食鹽水和飽和的NaHCO3溶液洗滌,無水硫酸鎂干燥,過濾,濃縮,得淡黃色液體產(chǎn)物1,直接用于下一步反應;
產(chǎn)物2的合成:
產(chǎn)物1和諾氟沙星反應,控制配比為產(chǎn)物1摩爾比過量20%,以二甲基甲酰胺為反應介質(zhì),三乙胺為催化劑,攪拌、加熱升溫到80℃,反應過夜,冷至室溫,滴加0.5N的鹽酸控制pH6,攪拌使體系重新冷卻到室溫,過濾,依次用蒸餾水、無水乙醇洗滌慮餅,干燥,得粗產(chǎn)品產(chǎn)物2,用乙醇重結(jié)晶;
產(chǎn)物3的合成:
產(chǎn)物2和三氟乙酸反應,脫碳酸二叔丁酯基:室溫攪拌反應3小時,真空濃縮,將殘留物溶于乙醇,加入三乙胺,靜止,過濾得到的粗品用乙醇和氯仿重結(jié)晶提純,得產(chǎn)物3半抗原,命名為N-2-乙胺-諾氟沙星;
(2)人工抗原的合成
合成路線:
透析袋的前處理:取5-10cm的透析袋,于沸水中煮沸5min,再用60℃的去離子水沖洗3min,保存在4℃去離子水中備用;
磷酸鹽緩沖溶液的配置:0.2Mol/L磷酸二氫鈉19mL和0.2Mol/L磷酸氫二鈉81mL加水至2000mL混合即為pH7.4的磷酸鹽緩沖液;
偶聯(lián)蛋白:
取0.1mmol的產(chǎn)物3溶于2mL的pH7.4的磷酸鹽緩沖液中,攪拌下緩慢滴加戊二醛溶液,滴加至溶液的戊二醛最終質(zhì)量濃度為1.25%,成A液;
取0.002mmol的牛血清蛋白溶于10mL的pH7.4的磷酸鹽緩沖溶液中成B液;
攪拌條件下將A液緩慢滴加到B液中,攪拌過夜,磷酸鹽緩沖液中透析5天,得人工抗原N-2-乙胺-諾氟沙星-牛血清蛋白;
(3)抗原鑒定:N-2-乙胺-諾氟沙星-牛血清蛋白采用紫外掃描測定其偶聯(lián)比,分別在262nm、278nm處測吸光值,并計算其偶聯(lián)比。
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