1.?一種制備轉基因哺乳動物的PAMAM-D介導的精子載體法，其特征在于它包括以下幾個步驟：

(一)外源DNA質粒酶切成末端為粘性的線性構型，針對不同精子和目的基因，確定外源DNA的用量范圍；在PAMAM-D合成代數G5以上及其與外源DNA電荷比2～50∶1的范圍內，以不同合成代數和劑量的PAMAM-D與外源DNA混合，形成復合物轉染精子，以原位雜交法檢測，將轉染率高而不損傷精子活力的復合物作為最佳組合，其外源DNA的用量與PAMAM-D代數和劑量作為最佳組合條件，制備最佳組合的PAMAM-D/外源DNA復合物用于轉染精子細胞；

(二)將采集的精子用培養液進行充分洗滌，徹底去除精清中的IF-1，以利外源DNA與精子的結合；對洗滌后的上清液以斑點雜交法監測IF-1，以上清液IF-1達到陰性的洗滌次數作為應洗滌的次數，將取得的精子密度調整至10⁷/ml備用。

(三)制備轉染外源DNA的精子，其方法有二，①體外法：用由步驟(一)所得PAMAM-D/外源DNA復合物與步驟(二)取得的去除了精清的精子共孵育，在體外制取轉染外源DNA的精子；②體內法：將由步驟

(一)取得的PAMAM-D/外源DNA復合物打點式注入睪丸內，在體內形成轉染外源DNA的精子；

(四)將由步驟(三)中經體外共孵育法處理的的精子，以熒光蛋白標記用流式細胞儀進行分選，將轉染外源DNA的精子篩選并提取，以單一轉染外源DNA的精子用于受精，以提高外源DNA在受精卵中的結合率；在分選前先進行洗滌并以DNaseI消化處理，以消除假陽性；

(五)由步驟(三)體外共孵育并經步驟(四)篩選的轉染外源DNA的精子，用人工體內授精，或經體外共孵育受精后培育受精卵進行胚胎植入，也可以用睪丸內注入由步驟(一)形成的PAMAM-D/外源DNA復合物，通過自然交配或者采集精液進行人工授精；由以上方式使雌性動物受孕，產生轉基因動物。