技術領域

本發明屬于生物制品領域，具體涉及一種水痘病毒新毒株的分離純化、用該毒株制備的水痘減毒活疫苗及該疫苗的制備方法。

背景技術

水痘是一種常見、多發、有高度接觸傳播性的兒童急性傳染病，發熱的同時伴全身水皰性發疹。水痘是由于兒童感染了水痘-帶狀皰疹病毒(簡稱VZV)而引起的，該病毒主要通過空氣飛沫傳播和接觸傳染，傳染率為80～90％。

國內外業已證明，控制水痘最可靠、最根本的措施是接種疫苗，而且兒童接種一次即可獲得終身免疫。目前市場上水痘活疫苗的制備均采用的是1983年被世界衛生組織(WHO)推薦的Oka疫苗株，其是日本學者高橋于1974年從一名三歲水痘患兒的皮膚水皰中分離后，在人胚肺細胞中34℃連續培養11代后，繼續在豚鼠胚胎纖維(GPEF)細胞中培養12代，隨后在WI-38細胞中培養3代及MRC-5細胞中培養2代獲得。1995年3月17日，美國食品和藥物監督管理局(FDA)正式批準默沙東(Merck，Sharp?&?Dohme)公司用Oka株生產的水痘-帶狀皰疹減毒活疫苗可常規用于1歲以上未曾患過水痘的兒童和成人的免疫接種，用以預防水痘的感染和流行。

除默沙東公司外，高橋博士所在的日本Biken研究所已通過商業轉讓準許比利時的史克必成(SmithKline?Beecham?Biologicals)、法國的巴斯德(Pasteur?Merieux-Connaught)、中國上海生物制品研究所等使用該毒株進行凍干水痘減毒活疫苗生產。中國長春生物制品研究所從韓國BORAN制藥公司引進并采用Oka株利用2BS細胞株進行水痘活疫苗的生產。

發明內容

本發明的目的在于提供另一種可用于水痘疫苗生產的新的水痘-帶狀皰疹病毒，使用該病毒制備水痘疫苗以及用該病毒制備水痘疫苗的方法。

本發明的發明人經過大量的工作，成功地從一名4歲水痘患兒的水皰液分離并純化出一新的水痘-帶狀皰疹病毒株，命名為VZV84-7株。經血清學檢測、電鏡觀察、交叉中和試驗、鑒別試驗等證實VZV84-7株確為水痘-帶狀皰疹病毒(Varicella-herpes?Zostervirus)新毒株，發明人建議的分類命名為人皰疹病毒3型(拉丁文為Human?Herpesvirus?III)。第23代的VZV84-7株已于2006年2月10日保藏于中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心(CGMCC)，保藏編號為CGMCC?No.1618。

經過對其病毒基因組進行全基因序列測定分析發現，VZV84-7株水痘病毒基因組全長125123bp，G+C含量為46.1％；VZV84-7株水痘-帶狀皰疹病毒具有其獨特的基因特征，其R2可變區重復單位的拷貝數為7個，R4可變區為9個，R5可變區為1個。本發明的水痘-帶狀皰疹病毒株的核苷酸序列如序列表中序列1所示。種系發育分析顯示，VZV84-7株水痘病毒基因組與其他水痘-帶狀皰疹病毒株的同源性為99.1％～99.6％；其不同于其他任何水痘病毒株，但與Oka株(EMBI：AB097933，AB097932)、VarilRix株(GI：66865971)、Varivax株(GI：66866043)親緣關系較近。

本發明還提供一種減毒水痘活疫苗，其由本發明的VZV84-7毒株制備而來。其可為凍干劑型，也可為液體劑型。單劑劑量一般為0.5ml。單劑的滴度為至少2000PFU、優選至少3000PFU、更優選至少4000PFU。對于疫苗單劑滴度的上限沒有限制，越高越好，但在目前生產工藝所制備的疫苗單劑滴度最高可達100000PFU。

本發明還提供一種制備減毒水痘活疫苗的方法，包括如下步驟：

a)宿主細胞的培養步驟；在該步驟中，在pH6.8-7.0的含有10％(重量/體積)小牛血清的液體培養基中使宿主細胞擴增傳代；

b)病毒的接種步驟；該步驟如下完成：棄去步驟a)中所用的培養液，用本發明的VZV84-7的毒株感染步驟a)獲得的宿主細胞并使接種了病毒的宿主細胞在pH7.2-7.4的含有2％(重量/體積)小牛血清的液體培養基中維持生長的步驟；

c)病毒的增殖步驟；即棄去步驟所用的培養液并使步驟b)得到的培養物在含有0.05-0.5％(重量/體積)人白蛋白的液體培養基中培養以使病毒進一步增殖；以及

d)收獲步驟c)培養的病毒的步驟。