[發明專利]新的水痘病毒毒株、水痘減毒活疫苗及其制備方法有效
| 申請號: | 200610083049.3 | 申請日: | 2006-05-29 |
| 公開(公告)號: | CN101082041A | 公開(公告)日: | 2007-12-05 |
| 發明(設計)人: | 李秀玲;王桂秋;王用楫;章以浩;項金忠;許麗鋒;彭佩霞;龐成華;謝云;張晨;劉立新 | 申請(專利權)人: | 北京生物制品研究所 |
| 主分類號: | C12N7/00 | 分類號: | C12N7/00;C12N15/38;C12N7/04;A61K39/25 |
| 代理公司: | 北京天昊聯合知識產權代理有限公司 | 代理人: | 丁業平;張天舒 |
| 地址: | 100024北*** | 國省代碼: | 北京;11 |
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| 摘要: | |||
| 搜索關鍵詞: | 水痘 病毒 減毒活 疫苗 及其 制備 方法 | ||
1.一種水痘-帶狀皰疹病毒(Varicella-Zoster?virus)株,其保藏編號為CGMCC?No.1618;其基因組中的R2可變區重復單位的拷貝數為7個,R4可變區重復單位的拷貝數為9個,R5可變區為1個;其基因組全長125123bp,G+C含量為46.1%;其核苷酸序列如序列表中序列1所示。
2.一種減毒水痘活疫苗,其由權利要求1所述的毒株制備而來。
3.權利要求2所述的疫苗,其為凍干劑型。
4.權利要求2所述的疫苗,其為液體劑型。
5.一種制備減毒水痘活疫苗的方法,包括如下步驟:
a)宿主細胞的培養步驟;在該步驟中,在pH6.8-7.0的含有10%(重量/體積)小牛血清的液體培養基中使宿主細胞擴增傳代;
b)病毒的接種、生長步驟;該步驟如下完成:棄去步驟a)中所用的培養液,用權利要求1所述的毒株感染步驟a)獲得的宿主細胞并使接種了病毒的宿主細胞在pH7.2-7.4的含有2%(重量/體積)牛血清的液體培養基中維持生長的步驟;
c)病毒的增殖步驟;即棄去步驟b)所用的培養液并使步驟b)得到的培養物在含有0.05-0.5%(重量/體積)人白蛋白的液體培養基中培養以使病毒進一步增殖;以及
d)收獲步驟c)培養的病毒的步驟。
6.權利要求5所述的方法,其中步驟b)的感染復數M.O.I.為0.01-1。
7.權利要求5所述的方法,其中
所述的液體培養基為選自MEM、DMEM、199、RPMI1640、Eagle’s、Earle’s中的任一種培養液。
8.權利要求5所述的方法,其中
在步驟b)和步驟c)之間還包括用PBS、生理鹽水、Earle’s液或Eagle’s液對培養細胞進行沖洗的步驟。
9.權利要求5所述的方法,其中所述的步驟d)是如下進行的:在細胞的病變程度達至少75%時,吸出所述液體培養液,加入保護劑后,破碎細胞,去除細胞碎片,獲得疫苗原液。
10.權利要求5-9所述的方法,其中所述的宿主細胞為2BS細胞。
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