[發明專利]抗家畜和水產病原體的特異性IgY或復合IgY及其應用無效
| 申請號: | 200610081289.X | 申請日: | 2006-05-29 |
| 公開(公告)號: | CN101081866A | 公開(公告)日: | 2007-12-05 |
| 發明(設計)人: | 包晟;王長安;蔡婷英;謝彥博 | 申請(專利權)人: | 雅臣藥業集團(遠東)有限公司 |
| 主分類號: | C07K16/02 | 分類號: | C07K16/02;A61K39/395;A61P31/00 |
| 代理公司: | 深圳市順天達專利商標代理有限公司 | 代理人: | 郭偉剛;易釗 |
| 地址: | 中國香港新界沙田大埔公路十二咪生*** | 國省代碼: | 中國香港;81 |
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| 摘要: | |||
| 搜索關鍵詞: | 家畜 水產 病原體 特異性 igy 復合 及其 應用 | ||
1.一種抗家畜和水產病原體的特異性IgY或復合IgY,其特征在于,該IgY是選自抗豬傳染性胃腸炎和流行性腹瀉致病菌特異性IgY、抗豬傳染性胃腸炎和流行性腹瀉的病毒特異性IgY、抗水產致病菌特異性復合IgY、抗水產真菌特異性復合IgY、抗水產病毒特異性復合IgY、抗呼腸孤病毒特異性IgY、抗魚皰疹病毒抗原特異性IgY、抗牛傳染性胃腸炎和流行性腹瀉致病菌特異性IgY和抗牛傳染性胃腸炎和流行性腹瀉的病毒特異性IgY中的一種或一種以上的組合。
2.一種制備抗家畜和水產病原體的特異性IgY或復合IgY的方法,其特征在于,包括一下步驟:
1)篩選引致家畜和水產類感染性疾病的主要病原體,并按照這些病原體的“抗原交叉性”進行分類組合;
2)針對篩選和分類組合出的各種家畜、水產類感染性疾病病原體,制備相應的抗原;
3)制備含高活性抗體的免疫蛋:取上述抗原,選擇具有高免疫應答能力的正在產蛋的健康無特定病原體攜帶的健康產蛋禽類,對其進行免疫注射,首次免疫注射時對每只產蛋禽注射抗原1ml,第一次注射后間隔7天,以同樣劑量注射第二次,第二次注射后再間隔7天以相同劑量、方法注射第3次;從第一次注射后第20天開始揀取產蛋禽所產出的高免疫蛋,并對應不同的抗原,對所檢取的免疫蛋進行編碼標記;
4)制備抗家畜和水產病原體特異性IgY或復合IgY粗品:取上述高免疫蛋用消毒液浸泡15~30分鐘消毒,再經無菌蒸餾水沖洗、晾干,置于打蛋機中將蛋殼打碎,用蛋黃篩濾除蛋清留下蛋黃,加入4~8倍蒸餾水稀釋攪拌均勻,調節pH值至5.5~6.0,4~6℃下靜置過夜,稀釋液在8,000-12,000r/min下高速離心20分鐘,取上清液用超濾機超濾濃縮;除菌后,將所得濃縮液用冷凍干燥機干燥,即制得抗家畜和水產病原體的特異性IgY或復合IgY粗品;
5)制備抗家畜和水產病原體特異性IgY或復合IgY純品:將上述制得的抗家畜和水產病原體特異性IgY或復合IgY粗品經離子交換柱和凝膠交換柱純化,即得純特異性IgY或復合IgY。
3.根據權利要求2所述的方法,其特征在于,步驟1)中篩選和提取出的病原體是引起豬、牛、水產致病的細菌類、病毒類、真菌類病原體,包括:腸毒性大腸埃希氏菌、C型魏氏梭菌菌株、豬鏈球菌、豬傳染性胃腸炎病毒、豬流行性腹瀉病毒、豬輪狀病毒、柱狀嗜纖維菌、嗜水氣單胞菌、氣單胞菌、孤菌、水霉菌、綿霉菌、絲囊霉菌、鰓霉菌、呼腸孤病毒、魚皰疹病毒、牛腸毒性大腸埃希氏菌、B型魏氏梭菌菌株、牛傳染性胃腸炎病毒、牛流行性腹瀉病毒以及牛輪狀病毒。
4.根據權利要求2所述的方法,其特征在于,步驟2)中制備的家畜和水產病原體抗原包括:豬傳染性胃腸炎和流行性腹瀉致病菌復合抗原、豬傳染性胃腸炎和流行性腹瀉的病毒復合抗原、水產致病菌復合抗原、水產真菌復合抗原、水產病毒復合抗原、呼腸孤病毒抗原、魚皰疹病毒抗原、牛傳染性胃腸炎和流行性腹瀉致病菌復合抗原、牛傳染性胃腸炎和流行性腹瀉的病毒復合抗原。
5.根據權利要求4所述的方法,其特征在于,其中制備豬傳染性胃腸炎和流行性腹瀉致病菌復合抗原的方法是:取腸毒性大腸埃希氏菌、C型魏氏梭菌、豬鏈球菌標準菌株進行培養繁殖,收集培養物,提純后得到腸毒性大腸埃希氏菌、C型魏氏梭菌、豬鏈球菌,然后將此三種細菌按1∶1∶1的比例混合,再采用超聲粉碎機粉碎,獲得含全菌和菌體成份的混合物;將混合物按1~10∶10~1的比例加入福氏佐劑,再置入高速勻漿機中粉碎勻化,形成油包水溶液,制得牛傳染性胃腸炎和流行性腹瀉致病菌菌體組合復合抗原。
6.根據權利要求4所述的方法,其特征在于,其中制備豬傳染性胃腸炎和流行性腹瀉致病菌復合抗原的方法是:培養豬大腸桿菌k88、k99兩種纖毛,再將培養好的兩種纖毛先按1~10∶10~1的比例混合均勻后按1~10∶10~1的比例加入福氏佐劑,置入高速勻漿機中粉碎勻化,形成油包水溶液,制得傳染性胃腸炎和流行性腹瀉致病菌纖毛組合復合抗原。
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